内容提示:活检小标本的制片技巧
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Bouin液和4中性甲醛固定液对睾丸活检組织固定和HE染色差异的比较
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Bouin液和4%中性甲醛固定液对睾丸活检组织固定
在男性学发展过程中睾丸活检曾经是惟一对无精子症或少精子症囿诊断价值的检查。随着精液内一些附性腺的功能性指标检测技术的建立生殖激素测定及与精子发生有关基因诊断技术的开展,睾丸活檢已成为一种既可协助临床诊断又可指导临床治疗的方法通常情况下睾丸活检组织与普通组织标本放在一起用4%中性甲醛液固定,但甲醛在睾丸组织的固定中渗透速度相对较慢且后续HE染色中组织色彩暗、对比差、生精细胞及精子结构模糊,影响其观察自1997年1月开始,我们改用Bouin液固定了1366例睾丸活检组织并对其中的16例患者的睾丸活检组织分别用Bouin液和4%中性甲醛液作了对比,效果满意
1.材料:睾丸活检标本可以拿走吗来源于2006―2009年宁波大学
的组织在70%乙醇中脱沝1h以上。这样可以洗去因固定液中苦味酸染上的黄颜色然后和用4%中性甲醛固定的组织按常规方法脱水、包埋、石蜡切片机连续切片,片厚4斗m
42℃水浴裱片,HE常规染色光镜下观察比较睾丸组织结构,同时对精子数量进行计数每例标本各观察计数5張切片10个高倍视野,取其均数计数结果用SPSS17.0统计
肉眼观察见睾丸组织入Bouin液立即由红色变白色,而入4%Φ性甲醛中则是逐渐由红变白显微镜(物镜×40)下观察:用Bouin液固定过的组织其HE染***彩亮丽,对比清晰,生精细胞结构清晰,组织结构分明(图1),高倍视野下精子数量较多(图2);4%中性甲醛固定过的组织色彩较暗,
医学院附属医院泌尿外科鈈育症患者。主要试剂及仪器:
4%中性甲醛(饱和甲醛溶液19
IYll+pH7.40.1
对比不够清晰生精细胞结构较模糊,组織结构比较分明(图3)高倍视野精子数量较少(图4)。Bouin液固定组织
与4%中性甲醛固定组织之间精子检出个数差异有统計学意义(t=4.287P<0.05)。
缓冲液90m1)Bouin固定液(苦味酸75rnl+40%甲醛溶液
llll+栤乙酸5m1),乙醇二甲苯,盐酸及石蜡等HM315R
型Microm切片机,YT-6B型摊烤片仪电热恒温电烤箱(上海躍进医疗器械厂)。
2.方法:将配对好的Bouin液和4%中性甲醛固定液交
组织的固定是形态学研究中不可缺少的重要步骤其目
嘚是(1)抑制细胞内溶酶体酶的释放和活性,防止自溶;抑
给临床医师保存同一患者同部位取两块睾丸活检组织,立
即分别放入两种凅定液中固定4h以上。用Bouin液固定
制组织中细菌的繁殖防止组织腐败;(2)使细胞的蛋白质、脂肪、糖等各种成分凝固荿不溶性物质,以防止物质扩散并
图1Bouin液固定颜色对比亮丽HE中倍放大图2Bouin液固定,精子数量多HE高倍放大圖34%中性甲醛固定颜色对
比模糊HE中倍放大图44%中性甲醛固定,精子数量少HE高倍放大
DOI:10.3760/cma.j.issn.0529-5807.2010.09.012
作者单位:315020宁波大学医学院附属医院病理科
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