MIP-1α和sclerostin在骨髓瘤骨病患者中的表达及相互关系的研究--《广西医科大学》2016年博士论文
MIP-1α和sclerostin在骨髓瘤骨病患者中的表达及相互关系的研究
【摘要】：骨髓瘤骨病(MBD)是MM患者的最常见的并发症之一。MBD发生的主要机制:在骨髓微环境中,瘤细胞与骨髓基质细胞(BMSCs)通过RANKL/RANK等经典途径、巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α)等非经典途径的信号通路,增强破骨细胞(OC)的数量、抑制成骨细胞(OB)的功能,最后导致溶骨性损害。本人前期研究及国内外最近研究报道MIP-1α不仅有增加OC的数量和增强OC的功能,还有抑制OB的分化和成熟,但抑制OB的具体机制不明。骨硬化蛋白(sclerostin)是SOST基因的表达产物,参与骨形成调节,决定骨重建过程中的骨量和结构,是Wnt/β-信号通路的重要抑制剂,而Wnt/β-信号通路在介导OB分化、成熟及功能调节中是非常重要的。最近研究报道:MM患者外周血sclerostin增高,但其增多的机制以及与MM患者的生物学特征尚不明确。本研究试图通过探讨MBD患者骨髓血浆及骨髓瘤细胞株MIP-1α和sclerostin蛋白的表达,以此探明这两种蛋白与患者的临东快氮分期、生化特征、预后及两者之间的关系等。通过从美国国立生物技术信息中心(GEO)的共享数据库中下载MBD相关的基因芯片表达数据谱GSE754和GSE755,运用生物信息学相关工具进行数据和文献挖掘,通过大数据分析MIP-1α和sclerostin蛋白是否具有一定的关联性。进一步在体外验证这两种蛋白的相互关系,为MBD患者的防治开拓新思路和提供理论依据。本论文主要从如下三方面进行探讨。第一部分MIP和sclerostin在骨髓瘤骨病患者中的表达及与临东目的:本研究旨在探讨MIP-1α和sclerostin在MBD中的表达,MIP-1α和sclerostin与MBD分级、ISS临东及两者相互之间的关系。方法:以53名MBD患者(其中女24名,男29名),人多发性骨髓瘤细胞株RPMI-8226、H929及30名白细胞减少症、免疫性血小板减少症患者为研究对象。酶联免疫吸附法(ELISA)定量检测骨髓血浆MIP-1α和sclerostin蛋白的水平;RT-PCR技术检测MIP-1α和sclerostin蛋白的m RNA表达;电化学发光免疫法测量甲状旁腺素(PTH)和1,25(OH)2Vit D3的水平,全自动生化分析仪检测患者的各项常规生化指标等。实验数据以均数±标准差表示,使用SPSS18.0统计学软件进行分析。结果:27例患者的sclerostin水平升高,37例患者中MIP-1α蛋白的水平明显升高。MBD患者的MIP-1α(153.35±81.09 pg/ml)和sclerostin(539.42±201.86 pg/ml)蛋白浓度要高于对照组(t=6.85和8.26,p均为0.00)。体外骨髓瘤细胞株RPMI-8226、H929培养上清液中MIP-1α和sclerostin蛋白的水平与空白对照组相比均明显增高(t值分别为23.52,13.42;P值均为0.000.01),RT-PCR的结果分析也证实了大部分的MBD患者骨髓单个核细胞(BMMNCs)及两种骨髓瘤细胞株均表达这两种蛋白,但表达的量不一致。临抗ISS分期3期患者中的MIP-1α(173.81±97.74 pg/ml)和sclerostin蛋白(0.61±0.20ng/ml)的表达水平明显高于2期的患者(MIP-1α:117.73±54.35 pg/ml,sclerostin:0.42±0.18 ng/ml)(p值分别为0.01、0.06);MBD分级C组患者的MIP-1α蛋白(MIP-1α170.37±103.69 pg/ml)和sclerostin(0.60±0.02 pg/ml)水平也明显高于A+B组(MIP-1α:119.82±38.15 pg/ml,sclerostin:0.45±0.19 ng/ml))(P值均小于0.01)。sclerostin水平与MIP-1α蛋白(r=0.720,p=0.000.001),β2-MG(r=0.467,p=0.000.001,LDH(r=0.453,p=0.001),a Ca水平(r=0.313,p=0.023)之间呈明显的正相关,而sclerostin蛋白与b ALP(r=-0.578,p=0.000.001),HB(r=-0.412,p=0.002),ALB(r=-0.388,p=0.004)之间呈负相关;sclerostin、MIP-1α蛋白的水平与MBD分级(r=0.439和0.358,p=0.001和0.008)和ISS分期(r=0.436和0.323,p=0.001、0.018)呈正相关,高水平(0.54ng/ml)的sclerostin蛋白的MBD患者的中位生存时间也要短于低水平的患者(X2=7.376,p=0.007),而高水平(153.71pg/ml)的MIP-1α蛋白的MBD患者的中位生存时间虽短于低水平的患者,但两者比较无统计学差异(χ2=2.94,p=0.086)。双重线性回归结果提示ISS分期、sclerostin蛋白,β2-MG,MIP-1α蛋白是MBD分级独立的预后不良因素。结论:1.MIP-1α、sclerostin在MBD患者骨髓中水平增高、骨髓瘤细胞系能分泌这两种蛋白,但不同细胞系表达水平不一定相同;2.MIP-1α、sclerostin与临床ISS分期、MBD分级、与反应瘤负荷的相关指标β2-MG、LDH水平呈正相关,而与b ALP、HB、ALB则呈负相关。3.高水平(0.54ng/ml)的sclerostin的MBD患者的中位生存时间要短于低水平的MBD患者.4.MIP-1α与sclerostin呈明显的正相关。目的:采用生物信息学各种软件和在线工具进行筛选MBD的相关基因,并对其进行数据和文献挖掘,进一步通过大数据了解MIP-1α与sclerostin是否具有一定的关联性。方法:以MBD相关的两组患者基因芯片表达数据谱GSE754(139例有骨质破坏的MM患者)和GSE755(34例无骨质破坏的患者)为研究材料,运用Gene Spring GX11.5软件对基因芯片数据进行差异基因分析,GATHER等分析工具注释MBD相关差异基因可能的分子功能、参与的各种信号通路及通路富集,Cytosine软件分析差异基因编码蛋白质之间的相互作用关系。结果:从GSE754和GSE755基因芯片数据中分析得到共173个样本,经Genesis软件分析得出435个共同表达的差异基因,其中高表达的有286个基因,低表达的有149个基因。导入GATHER后发现这些差异基因主要与细胞增殖、钙磷代谢、细胞周期,细胞粘附与迁移、细胞凋亡、蛋白酶体、MAPK、趋化因子信号通路、Erb B、细胞周期,细胞减速分裂、Wnt、T、B细胞信号通路、JakSTAT、Rho A/ROCK等信号通路有关。将差异基因导入Cytosine软件中分析,结果发现BMD相关基因编码的蛋白质间的相互联系主要集中在NF-κB,PTK2B,ADD3,SPP1,IGF2,HSF2,HSF2,***K2,ADD3,GST6、CCL3、IL-6,Rh OA、sclerostin等基因上。结论:通过对基因芯片大数据进行生物信息学相关分析筛选得出MIP-1α与sclerostin具有一定的关联性,参与MBD的发生主要涉及到蛋白酶体、MAPK、Erb B、细胞周期,Wnt、Jak-STAT等信号通路。第二部分:骨髓瘤骨病相关基因的筛选及生物信息学分析目的:拟在体外通过细胞培养,外源性给予MIP-1α和sclerostin、MIP-1α和sclerostin单抗增加或中和骨髓瘤细胞株RPMI-8226、H929高表达sclerostin/MIP-1α的水平,观察该细胞的sclerostin/MIP-1α的水平变化。初步验证这两种蛋白的关联性。方法:以人骨髓瘤细胞系RPMI-8226、H929为研究对象,ELISA定量检测各组细胞上清液中的MIP-1α和sclerostin蛋白水平,RT-PCR定量检测各组细胞的MIP-1α和sclerostin m RNA水平。结果:两组细胞上清液中加入MIP-1α后再培养24小时,MIP-1α和sclerostin水平较不干预组明显增高(p值均为0.00);加入MIP-1α单抗后,两组细胞中的MIP-1α和sclerostin水平较不干预组明显下降(p值分别为0.00和0.001);加入sclerostin及sclerostin单抗后,两组细胞的MIP-1α水平较不干预组改变不明显(p值均大于0.05),加入sclerostin后,两组细胞的sclerostin水平明显增高(p值均小于0.01),而加入sclerostin单抗后,两组细胞的sclerostin水平明显下降(p值均小于0.01)。结论:MIP-1α可介导骨髓瘤细胞分泌sclerostin,具体机制需进一步研究。总之,本研究验证了sclerostin、MIP-1α两种蛋白在大部分MBD患者骨髓中及骨髓瘤细胞株中呈高表达,且与瘤负荷、MBD分级、ISS分期相关,两种蛋白呈明显的正相关。通过从GEO下载基因芯片大数据,运用生物信息学相关软件和在线工具进一步验证了sclerostin、MIP-1α两种蛋白有一定的关联。在体外通过细胞培养技术验证了MIP-1α可能通过各种途径促进瘤细胞或骨髓微环境分泌sclerostin。这揭示了MIP-1α在MBD中抑制OB的功能可能是通过sclerostin来介导的可能机制。第三部分体外通过细胞培养验证MIP-1α和sclerostin的关系
【关键词】：
【学位授予单位】：广西医科大学【学位级别】：博士【学位授予年份】：2016【分类号】：R733.3【目录】：
个人简历3-6中文摘要6-11ABSTRACT11-18第一部分MIP-1a和sclerostin在多发性骨髓瘤骨病患者中的表达及与临床生化特征的关系18-51 1.前言18-22 2.材料与方法22-34 3.数据分析34 4.结果34-47 5.讨论47-51第二部分 骨髓瘤骨病相关基因的筛选及生物信息学分析51-67 1.前言51-53 2.材料与方法53-54 3.结果54-64 4.讨论64-67第三部分 体外通过细胞培养验证MIP-1α 和sclerostin的关系67-83 1.前言67 2.材料与方法67-71 3.数据分析71 4.结果71-79 5.讨论79-83结论83-84参考文献84-94中英文缩略词表94-96文献综述96-108 参考文献104-108致谢108-110攻读学位期间发表的学术论文目录110-111
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京公网安备75号在自噬功能障碍情况下Nrf2调节失代偿性心脏重构及功能障碍的机制研究--《山东大学》2016年博士论文
在自噬功能障碍情况下Nrf2调节失代偿性心脏重构及功能障碍的机制研究
【摘要】：研究背景：转录因子NE-2相关因子2(Nrf2)是碱性亮氨酸拉链转录因子Cap'n'Coall(CNC)家族的成员,Nrf2通过与一种顺式增强子序列结合,我们称之为抗氧化反应元件(ARE),其核心核苷酸序列为'5-RTGACNNNGC-3',与这种增强子结合可启动200多种归属于不同领域的基因的表达,包括抗氧化基因、Ⅱ相解毒酶、转录因子、转运蛋白、清道夫受体以及分子伴侣蛋白等等。因此,Nrf2具有广泛而复杂的生物学功能,从经典的抗氧化防御,到细胞周期的调控和蛋白质量的控制。Nrf2对心脏的保护作用已经在许多动物模型中证实,包括以主动脉弓缩窄术(TAC)引发心脏压力负荷增加诱导的失代偿性心脏重构和心功能障碍模型。从分子水平上分析,转录因子Nrf2启动抗氧化蛋白以及解毒蛋白的表达,从而对抗氧化应激压力导致的心脏损伤和功能失常。同时,研究发现Nrf2可促进自噬清除毒性的多聚泛素化蛋白聚集体的功能,从而保护心脏不受细胞内毒性蛋白的损伤。但是,与之前的结论相反,最近的研究发现,在一种蛋白聚集诱发心肌病的小鼠动物模型中,这种模型通过向小鼠基因组内导入人来源的alpha B-晶状体蛋白基因突变体(hCryABR120G)并进行小鼠老龄化实现,敲除Nrf2基因可以抵御心脏的还原压力,减少多聚泛素化蛋白在心脏内的聚集,减缓心脏病理性肥大,改善心力衰竭。分析原因,持续性的Nrf2激活可能引发过度的还原压力导致hCryABR120G诱发的心肌病。然而,也有研究发现心肌特异性敲除Nrf2基因的小鼠对抗了TAC术后4周的压力负荷诱发的失代偿性心脏重构和功能障碍,这与Nrf2介导还原压力的理论相违背。另一方面,前期的研究也证明在自噬功能障碍的状态下,Nrf2的激活导致了肝脏的损伤。另外,自噬功能障碍在小鼠CryABR120G (mCryABR120G)基因诱导的心肌病中起了重要作用,mCryABR120G基因和hCryABR120G基因有着几乎相同的核苷酸序列,且衰老本身也伴随着自噬功能不足或损伤,从这些关联上看,衰老的hCryABR120G小鼠心脏中Nrf2介导的负面作用很可能与自噬功能不足有关。综上所述,在不同的病理状态下,Nrf2对心脏的作用可能是保护性的也可能是损伤性的,这种双面作用确切的机制目前还没有研究清楚。在本次研究中,我们发现心脏中Nrf2基因激活的病理生理学作用与自噬功能的完整性密切相关。自噬功能完整时Nrf2的激活对心脏的适应性反应起着重要作用,然而,在自噬功能障碍时,Nrf2的激活又介导了心脏的失代偿性重构和功能障碍。我们在研究中发现,自噬功能损伤可能是通过阻断核内Fyn控制的Nrf2向细胞核外的转运,从而导致了Nrf2在核内积聚,启动血管紧张素原的大量表达,进而恶化心脏失代偿性重构,加重心功能损伤。研究目的：1、研究Nrf2在TAC手术诱发的压力负荷引起的心脏重构和心功能障碍的病理进展过程中所起的作用；2、研究Nrf2激活对心脏的作用与自噬功能状态之间的关系；3、探讨在不同自噬功能状态下,Nrf2影响心脏功能的具体机制。研究方法：第一部分：1、用Nrf2基因敲除小鼠和野生型对照组小鼠进行主动脉弓缩窄手术,建立心衰模型,检测术后存活状况,在模型的早期EBD检测心肌坏死,模型的晚期阶段,超声、qPCR、WGA、Masson、免疫组化检测心脏重构状况和心功能,分析不同病理生理学阶段Nrf2基因敲除对心脏的影响；2、通过对TAC术后的WT小鼠术后不同时间点进行自噬流的检测,分析TAC术后不同阶段自噬功能的状态;3、运用心肌特异性Atg5基因敲除小鼠建立自噬功能障碍心脏的TAC模型,观察在自噬功能障碍时心脏的病理状态以及Nrf2和其下游基因表达水平。第二部分：1、以qPCR和Western Blot的方法检测白噬功能障碍小鼠心脏承受压力负荷时心衰相关基因Agt的表达状况；2、以Western Blot的方法检测自噬功能障碍对小鼠心脏承受压力负荷时各信号通路激活水平的影响,并与Nrf2基因敲除小鼠心脏压力负荷模型相对比,分析两者之间的联系；3、建立Nrf2/Atg5双敲小鼠心脏压力负荷动物模型,以免疫组化、western blot检测更具体的分析Nrf2对压力诱导心衰的病理生理作用与自噬功能的关系。研究结果：第一部分：1、Nrf2基因敲除加重了TAC手术诱发的心脏急性损伤,但使手术引起的远期的心脏重塑和心力衰竭得到了缓解；2、在压力负荷引起的心脏病程中,Nrf2激活所起的病理生理学作用与自噬功能的完整性有关；3、自噬功能障碍的小鼠心脏压力负荷增加时,存在Nrf2的过度表达和激活。第二部分：1、在自噬功能缺失的压力超负荷心脏中,Nrf2启动Agt的表达；2、在压力负荷诱导损伤的心脏,自噬功能障碍阻断了TAC诱导的Jak/Fyn通路的激活,使Nrf2向细胞核外转运降解减少。研究结论：1、自噬功能完整时Nrf2激活对心脏起保护作用,而当自噬功能障碍时,Nrf2的激活加速了心脏病理性重构和心功能失常的进程；2、在自噬功能完整时,Nrf2激活可以降低心肌坏死率保护心脏,但在自噬功能不足时,Nrf2激活了心脏内血管紧张素Ⅱ通路,使病情进一步恶化；3、自噬功能的障碍导致了Nrf2在细胞核内的聚集,进一步启动了血管紧张素原的高表达,Nrf2在核内的聚集与Jak2/Fyn信号通路的阻断有关。
【关键词】：
【学位授予单位】：山东大学【学位级别】：博士【学位授予年份】：2016【分类号】：R54【目录】：
中文摘要8-11Abstract11-15符号说明15-17第一部分 Nrf2对心脏的作用与自噬功能有关17-72 前言17-19 1 材料与方法19-48 2 结果48-50 讨论50-52 创新点52 局限性52 结论4552-53 附图53-67 参考文献67-72第二部分 自噬影响Nrf2在心脏重构中作用的机制研究72-99 前言72-74 1 材料与方法74-82 2 结果82-85 讨论85-87 创新点87 局限性87 结论87-88 附图88-94 参考文献94-99致谢99-100攻读学位期间发表的学术论文100-101学位论文评阅及答辩情况表101-102Article I102-133Article II133-157
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CASIO正式发布MZ-X系列专业编曲键盘:MZ-X500和MZ-X300!
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【关键词】：
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的区域,每个区域都可以使用Hex Layer引擎,可以最?时棚24个音?奏!MZ-X5GG的音色编辑能力将超越以往任何-款产品,可以定制属于自己的独,特声音!MZ-X500带有单音模式,并内置-个其他竞品所不具?奸合成购能库。?mz系列内置的效果器达到录音室级别,强大的效果器引擎除了混响、
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京公网安备75号P15INK4b慢病毒感染联合Bcr-abl siRNA及STI571对慢性粒细胞白血病K562细胞的实验研究--《第四军医大学》2014年博士论文
P15INK4b慢病毒感染联合Bcr-abl siRNA及STI571对慢性粒细胞白血病K562细胞的实验研究
【摘要】：慢性粒细胞性白血病(chronic myeloid leukemia.CML)是一种起源于多能干细胞异常克隆的恶性增殖性疾病,约占白血病总发病率的15%,多见于老年人。绝大多数CML患者白血病细胞中具有费城染色体(Ph染色体),它是有9号染色体长臂3区4带和22号染色体长臂1区1带相互易位融合而成,使位于9号染色体上的c-abl1原癌基因在第二外显子的5’端断裂,与22号染色体的M-Bcr基因第2或第3外显子的3’端结合,形成Bcr-abl融合基因,该基因编码P210蛋白,具有持续而强烈的酪氨酸激酶活性,可使粒细胞发生恶性增殖。基于Bcr-abl融合基因在慢性粒细胞性白血病中的重要病理意义,诺华制药公司于2001成功开发Bcr-abl特异性抑制剂--STI571用于CML的治疗,成为第一个靶向治疗药物。STI571的应用使原来CML的5年生存率由20%提升至90%,被称为是CML治疗史上的里程碑。然而,随后8年随访研究发现约16%的患者因药效降低停止服用STI571,有6%的患者由于不良反应而停止用药。随着STI571在CML治疗中的大量应用,其耐药性的问题已愈发明显,尤其是Bcr-abl基因突变位点的增多,出现了越来越多STI571治愈无效的CML患者。因此,寻找抑制效能更强或Bcr-abl以外的新靶点是当前cml治疗研究的一项前沿课题。最近的研究表明cml的治疗需在抑制bcr-abl的基础上,同时联合其它新发现或确认的靶点进行联合治疗,可显著提高cml的治愈率。p15ink4b是细胞周期蛋白激酶抑制剂ink4家族的一员,又被称作cdkn2b和mts2,它位于人类9号染色体,通常与p16ink4a和p14arf一起发生改变。p16ink4a和p15ink4b都可通过抑制cdk4/6,使细胞停滞于g1期。在血液病中,p16ink4a和p15ink4b表达降低通常是由于外界原因使基因发生甲基化所导致。而且,p15ink4b是唯一在mds和aml中发生甲基化的ink4家族成员,提示它在粒细胞疾病中的具有特异性。临床研究显示50-60%的骨髓异常增殖综合症患者和70-80%急性粒细胞性白血病患者都会发生p15ink4b的甲基化改变,提示我们p15ink4b可能参与了白血病的病理过程。p15ink4b的生物学活性研究表明它具有以下3方面的特性:1.p15ink4b在体内具有肿瘤抑制因子的作用,逆转录病毒引起的髓性单核粒细胞性白血病存在明显的p15ink4b基因5’cpg岛甲基化改变,而当p15ink4b缺失被重新构建时,粒细胞增殖情况得到显著抑制。2.p15ink4b显示可以促进造血干细胞向红细胞的分化,抑制其向粒细胞的分化。3.p15ink4b在促进树突细胞成熟中的作用,增强免疫监督作用。上述三种生物学活性均表明p15ink4b可能成为治疗cml的潜在靶点。基于上述理论基础,本研究旨在观察p15ink4b与bcr-abl抑制联合应用是否可提高cml的治疗效率。为了实现这一目的,我们首先构建了p15ink4b慢病毒表达载体,通过rt-pcr方法从人外周单个核细胞中扩增p15ink4b基因,经纯化回收后连接于pcdh-cmv-mcs-ef1-copgfp载体上构建p15ink4b慢病毒表达载体。然后对p15ink4b基因进行慢病毒包装,制备p15ink4b的病毒颗粒感染k562细胞,使其稳定表达p15ink4b基因。其次,构建bcr-ablsirna,采用荧光素酶基因(基因序号m)作为非特异性对照,将bcr-ablsirna转染k562细胞抑制p210bcr-abl的表达。同时,结合对sti571的研究,通过排列组合的方式,观察sti571,p15ink4b慢病毒感染和bcr-ablsirna转染联合作用后对k562细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡等的影响,为指导cml的治疗提供新的理论基础。1.p15ink4b慢病毒载体构建及病毒滴度测定p15ink4b慢病毒表达载体经慢病毒包装后,经逐孔稀释法测定病毒的滴度为2×108u/ml。p15ink4b慢病毒感染可显著抑制k562细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡。2.bcr-abl特异性sirna可显著抑制k562细胞增殖,使细胞阻滞于g0/g1期,且具有明显的诱导凋亡的作用;本研究发现bcr-ablsirna转染可显著抑制k562细胞内p210bcr-abl蛋白的表达,转染48h时,抑制率约为85%。细胞增殖实验显示,bcr-ablsirna转染可在24-96h内显著抑制k562细胞的增殖,在48h时,可显著阻滞细胞周期,使处于g1期的细胞比例明显增加,并且可诱导细胞凋亡的出现。3.p15ink4b慢病毒感染联合bcr-balsirna或sti571对k562细胞增殖抑制作用明显加强细胞增殖实验表明,p15ink4b慢病毒感染,bcr-ablsirna转染或sti571单独应用均可显著抑制k562细胞的增殖率,且呈现明显的时间依赖性。p15ink4b慢病毒感染+bcr-abl抑制抑制效率显著高于两者单独应用;p15ink4b感染+sti571抑制效率显著高于两者单独应用,bcr-abl抑制+sti571抑制抑制效率显著高于两者单独应用,上述结果提示我们p15ink4b慢病毒感染联合bcr-abl抑制可显著提升对k562细胞增殖的抑制率。4.p15ink4b慢病毒感染联合bcr-balsirna或sti571对k562细胞周期的影响流式细胞术检测结果显示,p15ink4b慢病毒感染可显著提高g1期细胞比率,降低s期细胞比率,表明p15ink4b表达可延缓dna复制。p15ink4b表达与bcr-abl抑制或sti571联合应用可显著增加处于g1期的细胞比率,提示p15ink4b与bcr-abl抑制或sti571联合应用可显著抑制dna的复制,降低细胞增殖速率。机制分析显示与单独治疗组相比,联合治疗组可显著抑制cyclind1和cdk4的表达,上述结果提示我们,联合治疗可显著抑制细胞周期依赖蛋白或激酶的表达,从而发挥阻滞细胞周期的作用。5.p15ink4b联合bcr-balsirna或sti571对k562凋亡的影响流式细胞术检测结果显示,与空载体组相比,p15ink4b慢病毒感染可显著提高细胞凋亡率,表现为annexin-v阳性细胞比率的增加。bcr-ablsirna转染和sti571亦有相似的作用。P15INK4b与Bcr-abl抑制或STI571联合应用可显著增加细胞凋亡率,提示P15INK4b与Bcr-abl抑制或STI571联合应用可显著促进K562细胞凋亡。机制分析显示,联合治疗组可显著提升Bax/Bcl-2的比值。结论:酪氨酸激酶抑制剂在CML的治疗中发挥了重要的作用,尤其是STI571的问世,大大提高了CML患者的生存时间和生存率。但是,随着STI571的大规模使用,STI571耐药性的问题凸显,这就要求我们在抑制Bcr-abl的同时,探寻新的治疗靶点以提高CML的治疗效果。P15INK4b作为经典的肿瘤抑制因子,具有抑制细胞周期蛋白激酶的功效。我们的研究显示,与单独应用Bcr-abl siRNA转染、STI571治疗或P15INK4b慢病毒转染相比,联合应用P15INK4b慢病毒转染与Bcr-abl及STI571可显著抑制K562细胞的增殖,增加细胞凋亡率,提示我们联合应用P15INK4b慢病毒感染与Bcr-abl siRNA及STI571可能具有提高CML治愈率的潜能,P15INK4b具有成为Bcr-abl以外治疗CML的潜在靶点的可能性。
【关键词】：
【学位授予单位】：第四军医大学【学位级别】：博士【学位授予年份】：2014【分类号】：R733.72【目录】：
缩略语表5-7中文摘要7-11Abstract11-16前言16-18文献回顾18-29实验一 P15INK4b慢病毒表达载体的构建、包装及鉴定29-41 前言29 1.材料29-31 2.方法31-38 3.结果38-39 4.讨论39-40 5.小结40-41实验二 P15INK4b基因慢病毒包装41-49 1.材料41-45 2.方法45-47 3.慢病毒滴度测定47-48 4.结果48 5.讨论48 6.小结48-49实验三 P15INK4b慢病毒感染K562细胞49-58 1.材料49-50 2.方法50-53 3.结果53-56 4.讨论56-57 5.小结57-58实验四 Bcr-abl siRNA的合成及效能鉴定58-73 1.材料58-61 2.方法61-68 3.结果68-71 4.讨论71-72 5.小结72-73实验五 P15INK4b与Bcr-abl siRNA/STI571联合治疗对K562细胞的影响73-90 1.材料73-75 2.方法75-77 3.结果77-87 4.讨论87-88 5.小结88-90参考文献90-100个人简历和研究成果100-101致谢101
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