细胞培养常见问题及回答
1、如何选用培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基（SFM）。在开始进行新的细胞培养时，可以参考下表所列的条件：
推荐使用的培养基
成纤维细胞
MEM，10% 热灭活马血清
成纤维细胞
DMEM, 10% 胎牛血清
F-12K, 10%胎牛血清
成纤维细胞
DMEM, 10% 胎牛血清
F-10, 15% 马血清和2.5% 胎牛血清
成纤维细胞
DMEM, 10% 胎牛血清
成纤维细胞
GMEM, 10% 胎牛血清 或MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA
McCoy'5A, 10% 胎牛血清
成纤维细胞
鼻甲骨细胞
MEM, 10% 胎牛血清 和 NEAA
MEM, 20% 胎牛血清 和NEAA
BME, 10% 小牛血清
F-12, 10% 胎牛血清
F-12K, 10% 胎牛血清
F-10, 15% 马血清和 2.5% 胎牛血清
成纤维细胞
DMEM, 10% 胎牛血清
成纤维细胞
DMEM, 10% 胎牛血清
成纤维细胞
DMEM, 10% 胎牛血清
MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA
成纤维细胞
MEM, 10% 胎牛血清
MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA
成淋巴细胞
淋巴瘤病人血液
RPMI-1640, 10% 胎牛血清
F-10, 15% 马血清和 2.5% 胎牛血清
F-10, 15% 马血清和 2.5% 胎牛血清
成淋巴细胞
T细胞淋巴瘤
RPMI-1640, 20% 胎牛血清
BME, 10% 小牛血清
结肠直肠腺癌
RPMI-1640, 10% 胎牛血清
MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA (in suspension, S-MEM)
MEM, 10% 胎牛血清
成淋巴细胞
早幼粒细胞白血病
RPMI-1640, 20% 胎牛血清
MEM, 10% HI 胎牛血清 和NEAA
McCoy's 5A, 10% 胎牛血清
F-12K, 10% 胎牛血清 和 肝素盐 100 ug/ ml
F-10, 15% 马血清和 2.5% 胎牛血清
成淋巴细胞
骨髓瘤病人骨髓
RPMI-1640, 10% 胎牛血清
MEM, 10% 胎牛血清
成纤维细胞
McCoy's 5A, 5% 胎牛血清
成淋巴细胞
RPMI-1640, 10% 胎牛血清
成淋巴细胞
骨髓性的白血病
RPMI-1640, 10% 胎牛血清
MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA
骨髓白细胞
红白血病病人骨髓
IMDM, 20% 胎牛血清
F-12K, 10%胎牛血清
骨骼肌成肌细胞
DMEM, 10% 胎牛血清
LLC-WRC 256
Medium 199, 5% 马血清
成纤维细胞
MEM, 10% 胎牛血清
MEM, 10% 胎牛血清 NEAA, 10ug/ml 胰岛素
类巨噬细胞
骨髓单核细胞白血病
DMEM, 10% 胎牛血清
BME, 10% 胎牛血清
BME, 10% 胎牛血清
MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA
MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA
F-10, 15% 马血清和 2.5% 胎牛血清
2、为什么要热灭活血清？ 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。 3、L－谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？ L－谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L－谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L－谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终确定。L－谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。 4、GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？ GlutaMAX-I二肽是L－谷氨酰胺的衍生物，将其不稳定的α－氨基用L－丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L－谷氨酰胺供利用。 GlutaMAX-I二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下，L－谷氨酰胺几乎完全降解。 5、为什么培养基中可以省去加酚红？ 酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为***，碱性时为紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。 6、如何用台盼兰计数活细胞？ 用无血清培养基把细胞悬液稀释到200－2000个/毫升，在0.1毫升的细胞中加入0.1毫升的0.4％的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。 7、如何消除组织培养的污染？ 当重要的培养污染时，研究者可能试图消除或控制污染。首先，确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。 高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。 ① 在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规细胞传代的浓度。 ② 分散细胞悬液到多孔培养板中，或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内，把选择抗生素加入到每一个孔中。例如，两性霉素B推荐下列浓度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。 ③ 每天观测细胞毒性指标，如脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。 ④ 确定抗生素毒性水平后，使用低于毒性浓度2－3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2－3代。 ⑤ 在无抗生素的培养基中培养细胞一代。 ⑥ 重复步骤4。 ⑦ 在无抗生素的培养基中培养4－6代，确定污染是否以已被消除。 8、培养基中丙酮酸钠的作用是什么？ 丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源。尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。 9、为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀？ GIBICO的胎牛血清 没有预老化，储存在2－8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。推荐在－20℃储存胎牛血清，避免反复冻融。 10、目录上说，Hank’s 平衡盐溶液（HBS）要在空气中使用，不需要CO2培养箱。原因是什么？ Hank’s 平衡盐溶液（HBS）和Earle’s平衡盐溶液（EBS）有什么本质的功能差别？ HBS和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平，碳酸氢钠的含量在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的PH值。Eagles液在空气水平的CO2 中，溶液会变碱，Hanks液在CO2 培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagles液。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks液就可以了。
本网站所有注明“来源：丁香园”的文字、图片和音视频资料，版权均属于丁香园所有，非经授权，任何媒体、网站或个人不得转载，授权转载时须注明“来源：丁香园”。本网所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系，我们将立即进行删除处理。
骨肉瘤相关文章
淋巴瘤相关文章
肺癌相关文章
近期热门文章
下载医学时间
每天10分钟成学霸
手机扫一扫
关注丁香园微信号
关于丁香园0&&parseInt(document.getElementById('custompage').value)页&&1&&parseInt(document.getElementById('custompage').value)楼&&
回复：10 &查看：5869 &
请教胎压问题
财产: 11536 爱卡币
来自: 陕西省|西安市
共获得爱卡币
请教胎压问题
我这个胎压是不是有些高呀，大家的车都是多少呢。
看说明貌似是245，我的放掉点气吧。
760) {this.resized= this.width=760; this.alt='Click here to open new window';}" onmouseover="if(this.width>760) {this.resized= this.width=760; this.style.cursor='hand'; this.alt='Click here to open new window';}" onclick="if(!this.resized) {} else {window.open('/large/7cefdfa5jw1dpjb9kha1ng.gif');}" onmousewheel="return imgzoom(this);" alt="" />
[每日热点]:
财产: 332 爱卡币
来自: 北京市|北京市
共获得爱卡币
你这胎压是凉车还是热车的？看起来还可以，有个高的，320的，放来跟其它的差不多吧，要不磨损面不一样。
虽然说明书上建议240的胎压，可以很多人都 反应240太低了，开起来太肉。
新车胎压高点也可以，轮胎受力面小，阻力小。不超过350就行，超过350车会报警。
[每日热点]:
爱车：暂无
财产: 35774 爱卡币
来自: 四川省|绵阳市
共获得爱卡币
这个有高了吧，我保持250kpa
[每日热点]:
财产: 11536 爱卡币
来自: 陕西省|西安市
你这胎压是凉车还是的？看起来还可以，有个高的，的，放来跟其它的差不多吧，要不磨损面不一样。
虽然说明书上建议240的胎压，可以很多人都 反应240太低了，开起来太肉。
胎压高点也可以，轮胎受力面小，阻力小。不超过350就行，超过350车会报警。 谢谢，凉车时的，今天自己放掉了点气，现在右前左后255,其他两个265,随手放的，不好调成一样的
760) {this.resized= this.width=760; this.alt='Click here to open new window';}" onmouseover="if(this.width>760) {this.resized= this.width=760; this.style.cursor='hand'; this.alt='Click here to open new window';}" onclick="if(!this.resized) {} else {window.open('/large/7cefdfa5jw1dpjb9kha1ng.gif');}" onmousewheel="return imgzoom(this);" alt="" />
[每日热点]:
财产: 11536 爱卡币
来自: 陕西省|西安市
这个有高了吧，我保持250kpa 自己放了点气
760) {this.resized= this.width=760; this.alt='Click here to open new window';}" onmouseover="if(this.width>760) {this.resized= this.width=760; this.style.cursor='hand'; this.alt='Click here to open new window';}" onclick="if(!this.resized) {} else {window.open('/large/7cefdfa5jw1dpjb9kha1ng.gif');}" onmousewheel="return imgzoom(this);" alt="" />
[每日热点]:
财产: 1939 爱卡币
来自: 上海市|上海市
共获得爱卡币
我这个胎压是不是有些高呀，大家的车都是多少呢。
看说明貌似是245，我的放掉点气吧。
胎压应该打多少以车厂推荐值为准。这是因为胎压的设定主要是考虑到车身的重量、底盘高度等车辆因素。
车厂气压推荐值通常可以在以下地方找到：车辆用户手册，驾驶室车门(B柱附近)旁边的标签，车辆驾驶座旁的抽屉，油箱盖小门。下图仅供参考：
760) {this.resized= this.width=760; this.alt='Click here to open new window';}" onmouseover="if(this.width>760) {this.resized= this.width=760; this.style.cursor='hand'; this.alt='Click here to open new window';}" onclick="if(!this.resized) {} else {window.open('/album/userphotos//08/4-fgh3-84hb-n204a28kh4l9.jpg');}" onmousewheel="return imgzoom(this);" alt="" />
上述提到的车厂胎压推荐值指的是冷却胎压。定义如下： 停车后至少三小时后或轮胎行驶不超过2公里。如果只能在热胎时测量胎压,请将所测得的胎压数值减去大约0.3巴(=4psi)就是轮胎冷却充气压力。
[ 本帖最后由 米其林工程师 于
16:01 编辑 ]
米其林(中国)投资有限公司已尽最大努力和最大勤勉以确保上述所登载和包含之所有信息的准确性、正确性和及时性。即便如此，由于技术信息存在的时效性、消费者个人理解上可能的差异、现场操作使用的熟练程度不同等因素,均可能导致上述所登载和包含之信息存在部分未更新或不完全适用之处。敬请谅解。
[每日热点]:
财产: 11536 爱卡币
来自: 陕西省|西安市
胎压应该打多少以车厂推荐值为准。这是因为胎压的设定主要是考虑到车身的重量、底盘高度等车辆因素。
车厂气压推荐值通常可以在以下地方找到：车辆用户手册，驾驶室车门(B柱附近)旁边的标签，车辆驾驶座旁的抽屉，油箱盖小门。下图仅供参考：
-4104-fgh3-84h...760) {this.resized= this.width=760; this.alt='Click here to open new window';}" onmouseover="if(this.width>760) {this.resized= this.width=760; this.style.cursor='hand'; this.alt='Click here to open new window';}" onclick="if(!this.resized) {} else {window.open('/album/userphotos//08/4-fgh3-84hb-n204a28kh4l9.jpg');}" onmousewheel="return imgzoom(this);" alt="" /> 谢谢，放了点气差不多了
760) {this.resized= this.width=760; this.alt='Click here to open new window';}" onmouseover="if(this.width>760) {this.resized= this.width=760; this.style.cursor='hand'; this.alt='Click here to open new window';}" onclick="if(!this.resized) {} else {window.open('/large/7cefdfa5jw1dpjb9kha1ng.gif');}" onmousewheel="return imgzoom(this);" alt="" />
[每日热点]:
锐界官方群：
财产: 229977 爱卡币
来自: 甘肃省|定西市
胎压应该打多少以车厂推荐值为准。这是因为胎压的设定主要是考虑到车身的重量、底盘高度等车辆因素。
车厂气压推荐值通常可以在以下地方找到：车辆用户手册，驾驶室车门(B柱附近)旁边的标签，车辆驾驶座旁的抽屉，油箱盖小门。下图仅供参考：
-4104-fgh3-84h...760) {this.resized= this.width=760; this.alt='Click here to open new window';}" onmouseover="if(this.width>760) {this.resized= this.width=760; this.style.cursor='hand'; this.alt='Click here to open new window';}" onclick="if(!this.resized) {} else {window.open('/album/userphotos//08/4-fgh3-84hb-n204a28kh4l9.jpg');}" onmousewheel="return imgzoom(this);" alt="" />
.cn/bbs/photo/.htm爱卡锐界官方群：
[每日热点]:
财产: 3 爱卡币
来自: 浙江省|杭州市
问了4S店,270比较适和锐界,不要超过300就行.
[每日热点]:
财产: 332 爱卡币
来自: 北京市|北京市
谢谢，凉车时的，今天自己放掉了点气，现在右前左后255,其他两个265,随手放的，不好调成一样的 凉车胎压有点高了，特别是320那个，跑跑就350了。
你自己放到255，265也算合适，跑跑能到280，290.
我现在也是热车290，295，凉车265，270
[每日热点]:
回复成功，收到1个大米！
10&&parseInt(document.getElementById('custompage_down').value)页楼
相关论坛：查看: 1127|回复: 25
请教：虾脱壳问题？
在线时间 小时
扫一扫，手机访问本帖
请问：虾脱壳跟什么有关系？缸里数据ph：6.1& &&&gh：3
老是发现虾在要脱壳的时候死亡，其它的时候虾的状态都很不错，这是什么原因？谢谢！
在线时间 小时
gh=3,水太软了，脱壳困难，所以挂了。要想办法让水硬一些。
在线时间 小时
GH3 有点低
在线时间 小时
要看什么虾了，水晶gh3问题不大，樱花有时候gh3就会有问题，高一些会好很多
在线时间 小时
GH偏低了。
在线时间 小时
GH低，用赫根把水GH调到4~6，一点点调，
脱壳未遂，典型症状
在线时间 小时
yishi 发表于
GH低，用赫根把水GH调到4~6，一点点调，
脱壳未遂，典型症状
在线时间 小时
在线时间 小时
在线时间 小时
gh低，水硬度不够，虾不能成功脱壳
在线时间 小时
水的硬度低
在线时间 小时
在线时间 小时
大家都说了~
在线时间 小时
ppd 发表于
要看什么虾了，水晶gh3问题不大，樱花有时候gh3就会有问题，高一些会好很多
在线时间 小时
qiucen 发表于
GH偏低了。
奇怪的是，我和这边的朋友都是用同样的自来水，虾在他那边没事，捞过来就出现脱壳困难？？？？
在线时间 小时
无痴 发表于
刚刚测了NO3=12.5-25之间，NO2=0，都正常吗？问题出现在哪里？主要还是GH吗？
在线时间 小时
主要还是GH,调高点。
在线时间 小时
☆Passer 发表于
刚刚测了NO3=12.5-25之间，NO2=0，都正常吗？问题出现在哪里？主要还是GH吗？
在线时间 小时
无痴 发表于
谢谢无痴兄，那还是找不到根本原因，刚刚拿了朋友的水测了一下GH2，他的缸虾都没事。
现在跟我朋友的缸的差别就剩泥了，他用ADA我用虾天，真不想是泥的问题？
在线时间 小时
GH高可帮助水晶虾换壳时，硬化脱壳后软弱的新壳。
Powered by