关注今日：0 | 主题：56414
微信扫一扫
【求助】如何获得基因家族全部成员的cDNA序列
页码直达：
这个帖子发布于4年零270天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
想研究某物种某基因的功能，在模式植物中该基因具有多个成员，在所研究的植物中我们已应用RACE技术分离了该基因的一个cDNA序列，通过何种实验方法可以分离到该基因家族其它成员的序列，从而对该基因家族所有成员的功能进行鉴定，为下一步应用基因工程技术进行遗传改良提供目标基因。谢谢！
不知道邀请谁？试试他们
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
不是做植物的，但是看到类似文献，似乎大概这个流程首先看是否基因组已知，如果已知，而且大部分基因都被annotate，则直接用你的cDNA去blast就行了，找到相似程度高到符合你目的的，再实验验证如果基因组未知，就比较麻烦了，要用你这个序列去cDNA文库里钓。估计现在没有什么人这么做了吧
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
buyao0 不是做植物的，但是看到类似文献，似乎大概这个流程首先看是否基因组已知，如果已知，而且大部分基因都被annotate，则直接用你的cDNA去blast就行了，找到相似程度高到符合你目的的，再实验验证如果基因组未知，就比较麻烦了，要用你这个序列去cDNA文库里钓。估计现在没有什么人这么做了吧这个物种基因组未知，不过我们准备下一步做转录组测序，数据量是4G，用拼接的结果来Blast，相似性结果高的基因如果是全长最好，如果没有覆盖全长，只能用RACE来克隆了，最后做定量PCR及转基因分析功能。这样的技术路线可行吗？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
fanby 这个物种基因组未知，不过我们准备下一步做转录组测序，数据量是4G，用拼接的结果来Blast，相似性结果高的基因如果是全长最好，如果没有覆盖全长，只能用RACE来克隆了，最后做定量PCR及转基因分析功能。这样的技术路线可行吗？现在确实不错，NGS还是非常强大的，以前要做很多年的工作现在一个实验室短期内也可能完成一点点建议，一个是转录组可能在不同组织，不同时间的转录本完全不同，你能测几个点呢，如果漏掉很多，有没有关系另外，同一个基因可能有不同的转录本，到时候你看到这样相似又不同的几个mRNA,到底当它是几个基因，还是同一个基因的不同isoform此外4G也要看是什么植物吧，不同植物的基因组大小差别很大，你这个数据可能没有什么信息量。更加全面安全当然也更贵的办法，是转录本和基因组都做个。而且现在不是做个新物种的基因组本身也能发文章吗，要是比较重要的物种，比如水稻小麦大熊猫啥的，都是2，30分的文章。拿着基因组再来做基因家族的“全部成员”才是比较全面的
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
关于丁香园QQ新闻资讯
腾讯系列软件
腾讯手机业务
QQ空间和校友的应用以及网页游戏
QQ技巧,QQ教程
QQ表情,QQ头像,QQ空间素材
QQ空间日志,聊天宝典
测试,生肖,星座,搞笑
您的位置： ->
发布日期： 22:37:02领地战基本信息：
领地名：丹霞风城，以家族为单位争夺丹霞风城的战斗，来获取龙城经营利益以及丹霞风城的特权。
领地名：天魄云城，以家族为单位争夺天魄云城的战斗，来获取天都经营利益以及天魄云城的特权。
领地名：华岚月城，以家族为单位争夺华岚月城的战斗，来获取无泪城经营利益以及华岚月城的特权。
领地名：紫蕴星城，以家族为单位争夺紫蕴星城的战斗，来获取出云和楼兰经营利益以及紫蕴星城的特权。
注：最开始领地是无属主关闭状态，不可进入。我们将通过第一次活动来决定四个领地的最初归属者，作为家族领地战声势浩大的开场。
攻城时间：
首轮（全攻混战）
20号晚上18：00—18：55&
19：00—19：55&
20：00—20：55&
华岚月城丹
21：00—21：55&
正常争夺（有攻守方）
22号晚上18：00—20：00&
20：30—22：30&
23号晚上18：00—20：00&
华岚月城丹
20：30—22：30&
正常争夺（有攻守方）
29号晚上18：00—20：00&
20：30—22：30&
30号晚上18：00—20：00&
华岚月城丹
20：30—22：30&
参加条件：
（1）家族挑战条件
l&&&&&&&&&
家族等级大于或等于三级。
l&&&&&&&&&
挑战家族不能为领主家族或在七天内被打败的领主家族。
l&&&&&&&&&
下战书者必须为满足以上两个条件的家族族长。
l&&&&&&&&&
领地城市拥有领主。
领地战争规则及流程：
玩家所在家族参与了领地战
2、战争胜负规则：
l&&&&&&&&&
领地拥有一个守护灵，守方无法对其攻击和不良状态，但是可以治疗。攻方可以对其攻击和不良状态，但不可以治疗。守护灵不接受任何增益状态。
l&&&&&&&&&
守护灵死亡后，获得守护灵阵营的挑战方取得胜利，在领地战持续时间内如果无挑战方杀死守护灵则原领主家族获胜。
l&&&&&&&&&
每个攻方家族成员攻击守护灵，都会获得临时性的战时积分（隐性）。
l&&&&&&&&&
玩家每对守护灵造成1点伤害，玩家所在家族增加1点战时积分。
l&&&&&&&&&
联盟家族获得的积分统一计算在联盟代表家族上。
&、战时联盟机制：
l&&&&&&&&&
城主方为守方联盟唯一代表，守方战果唯一受益者，盟方数量上限为32个家族。
l&&&&&&&&&
攻方多代表战时联盟制，挑战发起方为战果唯一受益方，盟方家族仅作为协助作战参与领地战争。申请挑战的攻方数量上限为32个家族，总上限为64个独立攻方。
l&&&&&&&&&
家族可以单独发起挑战，作为挑战方参与家族战；也可以加入某个战时攻方联盟（多家族组成），作为攻方联盟参与家族战。战争结果的最后受益者是挑战方而非盟方。战时联盟关系方不能通过任何方式相互攻击。
l&&&&&&&&&
除了本家族成员和盟友家族成员以外的玩家不能进入家族领地。
l&&&&&&&&&
不同的战时联盟之间可以相互攻击，但是需要打开PK开关。
l&&&&&&&&&
领主家族及攻方联盟代表家族有权在任何时候将本联盟的盟方家族剔除。被剔除的家族立刻成为独立攻方家族。
l&&&&&&&&&
盟方家族可以主动退出目前所在的攻方联盟或者守方联盟，退出后也是立刻成为独立攻方家族。
l&&&&&&&&&
在战争开始后，任意未参战家族可以在任何时候申请加入攻方联盟或者守方联盟。
l&&&&&&&&&
独立攻方家族指该家族是一个攻方联盟的代表家族，但是该攻方联盟仅有该家族存在，没有其它盟友家族。
l&&&&&&&&&
任何退出领主联盟的操作，会使该家族在领地战地图内的玩家传送出领地战地图，出生在城市重生点。
&、倒戈规则：
l&&&&&&&&&
可自由退出和加入联盟。
l&&&&&&&&&
守方联盟家族退出后成为独立攻方。
l&&&&&&&&&
攻方联盟家族退出后也成为独立攻防。
l&&&&&&&&&
独立攻方家族可以接受其他家族的加盟请求。
l&&&&&&&&&
独立攻方家族可以加入其它家族联盟。
l&&&&&&&&&
总之要加入其它家族联盟，必须是只有一个家族攻方联盟
l&&&&&&&&&
君处操作。
6、领地归属限定：
l&&&&&&&&&
同一个家族，不能同时拥有两个或两个以上的领地。
l&&&&&&&&&
领地家族成员也不能以任何形式参与其他领地的领地战争。
&&7、参与领地战流程：
1）非领主家族的族长去战争管理NPC
君处下战书。与NPC白虎星君对话选择“发起战争”，在弹出对话框中选择要挑战的领地之后，系统会弹出对话框要族长进行二次确认。（注：在战争时间之内发起的挑战是对应本场战争。其他时间发起的挑战对应的是下场战争）
2）家族族长可以选择参与家族战斗或者参与盟友家族的战斗。当家族族长点击“参与战争”按钮时，则会弹出对话框要求族长选择参与方，您可以在“挑战领主”、“攻方联盟”、“领主联盟”三项中选择其中任何一方，系统弹出二次确认“您确认要挑战领主/加入攻方/领主联盟吗？”
3）选择攻方联盟的家族，以协助姿态参与进攻方的领地战，还需选择加入哪个攻方联盟。双击攻方联盟家族中挑战方家族的家族名，系统就会弹出对话框确认：“您要加入XXX家族的战时联盟吗？”
4）确认后，系统在该家族的家族频道发出消息“您的家族参与了领地战的“进攻联盟方/领主联盟方”。
5）“查看参与方”按钮可以让玩家看到双方参与状况。双击列表中的家族可以查看该家族的信息。
1）“谢绝”按钮只有领主家族对领主联盟方家族及挑战家族族长可用，其他任何人都不可使用。该按钮用来剔除领主不愿意与之结盟参战的家族，战争开始10分钟后，领主不能再剔除已经参与战争的家族。
2）在任何时候都可以有家族中途加入战争，并且会在战争双方的系统提示里出现“XXXX家族加入了YYY家族的的攻方/领主联盟”。
3）后期加入攻方联盟的家族按照正常流程加入战争。
4）后期加入战时联盟的家族，会发送一个申请到主战方家族族长处，族长允许之后方可加入战争。
5）若玩家当时没有进入战场，只要战争仍在进行，就可以从战争管理NPC白虎星君处进入战场。
领地战场规则及战争附加设置：
1、战场基本规则：
l&&&&&&&&&
领地战地图最多同时容纳300人，单个家族不限制人数，也不限制家族数量。
l&&&&&&&&&
领地战持续时间为120分钟。
l&&&&&&&&&
领地战的战略目的为杀死守护灵并成为守护灵所属的阵营。争夺战最后胜方为杀死守护灵的挑战家族或者将守护灵保护到战争结束的领主方。领主决出之后，全屏光效和系统公告。
l&&&&&&&&&
攻方玩家死亡后复活在领地所在城市的任意位置。玩家在领地地图掉线再上之后也出现在NPC所在地图。（特殊处理）
l&&&&&&&&&
出生点为PK不能区域。
l&&&&&&&&&
进出城都通过NPC。
l&&&&&&&&&
门和结界石都是有阻挡的。
l&&&&&&&&&
战争结束后15秒所有非胜方联盟成员被传送出城，地点和复活点设置一致。
l&&&&&&&&&
领地战结束之前，任何家族族长都可以去NPC
君处宣布加入领地战，之后家族成员就可以进入领地战地图。宣战之后，宣战家族家族频道发出通知：你的家族对XXX领主家族XXXX宣布开战。一个家族不可同时向两个家族宣战。
、战场信息：
l&&&&&&&&&
增设城市频道，在战争时期，每个领地城和其属城的玩家都可以看到。
l&&&&&&&&&
倒戈、战争胜负、战争结束信息都通过动画在屏幕中央向所有参战和观战的玩家显示。
l&&&&&&&&&
战争结束后显示玩家在本场战争中死亡次数和杀敌数。
、领地战场内设施：
l&&&&&&&&&
领地内各处有NPC，包括装备商人以及道具商人，在战争期间装备双方均可使用。进攻方需要进入城内才可使用。
l&&&&&&&&&
玩家可以在任何时候去NPC
君处购买各种领地战专用设施
、个人中立状态处理：
l&&&&&&&&&
在领地战中没有家族的玩家被认为是中立玩家。
l&&&&&&&&&
中立玩家对守护灵的伤害不计算积分。
l&&&&&&&&&
中立玩家可以对攻守双方家族成员的攻击权限按照该玩家的PK状态来判定。
l&&&&&&&&&
无论中立玩家的PK状态如何，均可以被攻守双方玩家攻击。
领地特权：
l&&&&&&&&&
领地战的消耗包括家族消耗和个人消耗两部分，家族消耗主要在购买防御工事和攻城工具上，个人消耗则主要是药水（包括货架上的）及装备修理消耗。
l&&&&&&&&&
君处的金币消耗是不收税的。
领地战的产出物包含家族和个人两部分。家族部分主要是领地经营权中获取的游戏币。个人产出包括家族经营城市的交易优惠和城镇全向传送功能。
l&&&&&&&&&
除了本家族成员和盟友家族成员以外的玩家不能进入家族领地
l&&&&&&&&&
增加一个领地回城道具“返遁水晶”，使用后可以直接回到领地城，领主家族的玩家每个人都可以去领取一个
l&&&&&&&&&
领主家族的盟友家族成员只能通过传送NPC进入家族领地
l&&&&&&&&&
领主家族成员以及领地盟友家族成员可以在非战斗状态下随时免费传送到本家族领地，领地内有传送NPC，可以传送到任意一个有传送点的野外地图
l&&&&&&&&&
功能：记录玩家所有打开的传送点并记录在领地传送仙子处
l&&&&&&&&&
领地中有NPC“领地财务官”，领主每天可以去领地财务官处查看税收、收取税收、提取现今、调整税率。领主家族的长老可以使用收取税收的功能，但是不能调整税率
l&&&&&&&&&
领主每天只能调整一次税率，税率调整的范围为0%——30%。
l&&&&&&&&&
领主家族成员及盟友家族成员在自己家族管辖的城市交易免税。
l&&&&&&&&&
玩家在和NPC交易窗口的购买商品列表的最顶端可以看到税率，比如“龙城今日税率：23%”，税率显示的颜色在15%以下是蓝色，15%—30%是***，
领地领主在一个战争周期内可以豁免5个红名。功能接口在领地政务官处。
家族金库有工资发放面板，家族族长可以为每个成员设定工资比例，玩家每天上线领取，如果不领取则被系统退回家族金库。工资总额为领地税收收入的10%——100％，由族长分配。
上一篇：下一篇：