不同饲粮模式对奶牛乳腺长链脂肪酸摄取的影响--《动物营养学报》2017年04期
不同饲粮模式对奶牛乳腺长链脂肪酸摄取的影响
【摘要】：本试验旨在研究不同饲粮模式对奶牛乳腺长链脂肪酸摄取的影响。选用健康且胎次、体重[(554±21)kg]、泌乳期[(120±4)d]和产奶量[(24.30±1.47)kg/d]相近的荷斯坦奶牛30头,采用随机区组设计,分为3组,每组10头。3组奶牛饲喂不同模式的饲粮,即以苜蓿、羊草和全株玉米青贮为粗饲料的饲粮(MF组)、营养水平约同MF组但以单一玉米秸秆为粗饲料的饲粮(CS1组)和粗饲料比例等同MF组但以单一玉米秸秆为粗饲料的饲粮(CS2组)。试验期90 d,分3期进行,每期30 d,在每期的最后2 d采集饲粮样、乳样和血样进行检测分析。结果表明:1)不同饲粮模式对奶牛的体重和干物质采食量均无显著影响(P0.05),但对奶牛的产奶量、乳脂率和日乳脂产量均有显著影响(P0.05)。MF组的产奶量和日乳脂产量均显著高于CS1组和CS2组(P0.05),而CS1组则显著高于CS2组(P0.05);MF组的乳脂率显著高于CS1组(P0.05)。2)不同饲粮模式对奶牛动、静脉血浆中C16∶0、C18∶0、C18∶2cis-6、C18∶1 cis-9和总长链脂肪酸的浓度均无显著影响(P0.05)。3)不同饲粮模式对奶牛的血流量造成了显著的影响(P0.05),呈现出CS1组MF组CS2组。不同饲粮模式影响了奶牛动脉对总长链脂肪酸的供给量,表现为MF组和CS1组显著大于CS2组(5 629.51、6 605.02 g/d vs.3 878.91 g/d)(P0.05)。4)不同饲粮模式影响了奶牛乳腺对总长链脂肪酸的摄取率,表现为MF组和CS2组显著高于CS1组(10.99%、10.84%vs.7.39%)(P0.05)。5)不同饲粮模式影响了奶牛乳腺对总长链脂肪酸的摄取量,表现为MF组(618.69 g/d)CS1组(487.87 g/d)CS2组(420.56 g/d),组间差异显著(P0.05)。本研究揭示了在低质粗饲料条件下,增加精料浓度并不能有效提高奶牛乳腺对长链脂肪酸的摄取。
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：S823.5【正文快照】：
我国奶业成绩斐然,但奶牛养殖一直以数量扩张型发展,优质粗饲料供给不足,绝大多数地区仍以农作物秸秆作为奶牛的主要粗饲料来源,存在因饲料资源形成的不同饲粮模式,具体表现为饲粮结构和营养水平不合理,使得乳脂的含量普遍偏低。Elgersma等[1]研究表明,乳脂肪主要由长链(C16)
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京公网安备75号油菜EST资源中抗菌肽基因的生物信息学分析及BnLTP2的活性验证--《南阳师范学院》2017年硕士论文
油菜EST资源中抗菌肽基因的生物信息学分析及BnLTP2的活性验证
【摘要】：抗菌肽在植物天然免疫系统中具有重要的作用,它是一种由基因编码的小分子多肽,通常由10～50个氨基酸构成,其中大部分抗菌肽是碱性的阳离子肽,带2到7个正电荷。抗菌肽在生物天然防御体系中占有重要的地位,它在体内体外都能表现出抗菌活性。为实现高通量挖掘植物抗菌肽基因,本研究从NCBI数据库(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nucest)下载油菜(Brassica napus) EST序列1185911条到本地服务器,将油菜EST资源首先通过前处理和重拼接过程,获得201200个unigene,通过blastx, tblastn程序将unigene与来自于抗菌肽数据库APD2中的已知抗菌肽序列比对,利用GO, Interproscan, Clustalw等工具对这些基因进行功能注释、分类和结构预测,从中筛选获得972个包含候选抗菌肽的基因,这些候选的抗菌肽基因种类包括27类,其中很多这些同源的不同的抗菌肽基因是来自于不同的动植物和微生物,通过去重复序列后共获得605个新的抗菌肽序列,使用Phylip等软件进行进化树等分析,结果表明这些基因分属于脂转移蛋白基因(237个),防御素基因(Defesin,106个),蚊皮素(Snakin,91个),Hipposin(79个),橡胶蛋白类(Hevein,32个),硫素(Thionins15个)等6个家族,并对其中典型抗菌肽基因家族进行了二级结构分析。挑选预测到的一个植物转脂蛋白家族的抗菌肽基因BnLTP2,它的蛋白质序列由27个氨基酸组成。通过重叠延伸PCR的实验方法,把合成的BnLTP2抗菌肽基因克隆到pET30a-EDDIE-GFP表达载体上,在大肠杆菌中表达得到的包涵体融合蛋白会在体外复性,然后通过融合蛋白EDDIE的自我剪切并纯化后获得没有增加任何多余氨基酸的抗菌肽产物,经SDS-PAGE电泳发现在5 kD处有一条抗菌肽BnLTP2条带。分别以藤黄八叠球菌(Micrococo luteus)作为革兰氏阳性菌代表,大肠杆菌(Escherichia coli)作为革兰氏阴性菌代表,酵母菌(Pichia pastorisGS115)作为真菌的代表以管碟法作为检测抗菌肽BnLTP2抑菌活性的标准方法。结果表明BnLTP2对大肠杆菌、藤黄八叠球菌和毕赤酵母菌具有较强的抑菌活性。以油菜的主要致病菌核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)作为丝状真菌的代表,检测抗菌肽BnLTP2对丝状真菌的抗真菌活性。结果表明BnLTP2同样对核盘菌也有较强的抑菌活性。将纯化后的BnLTP2分别溶解在PBS、25%TFE.50%TFE和75%TFE溶液中,进行圆二色谱检测,从峰图中发现在194 nm处出现一个正峰,在208和222 nm处有一个负峰,这说明该抗菌肽具有典型的α螺旋结构,但是峰值不高,说明抗菌肽BnLTP2中螺旋含量较低。植物转脂蛋白LTP家族成员一般由91到95个氨基酸残基构成,它的最大特征是分子组成中含有八个高度保守的半胱氨酸,并缺乏色氨酸,在分子中有一个疏水腔,脂肪酸分子可以被这个疏水腔所容纳,由四对二硫键连接四个α螺旋构成稳固的结构。BnLTP2的蛋白序列由27个氨基酸组成,包含四个半胱氨酸,KICCPRTIDRNIYNACRLTGASMTNCA,但与LTP家族同源性最高,推测是完整LTP蛋白的部分结构。
【关键词】：
【学位授予单位】：南阳师范学院【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2017【分类号】：Q946【目录】：
摘要8-10Abstract10-121 绪论12-28 1.1 抗菌肽的背景知识12 1.2 抗菌肽的分类12-13 1.3 植物源抗菌肽13-14 1.4 抗菌肽的表达14-16
1.4.1 酵母表达系统14-15
1.4.2 植物表达系统15
1.4.3 动物表达系统15
1.4.4 细菌表达系统15-16 1.5 生物信息学的概述16-20
1.5.1 生物信息学在生物学领域中的应用17-18
1.5.2 生物信息学在预测基因方面的应用与研究18
1.5.3 利用生物信息学的方法对蛋白质结构和功能的预测18-19
1.5.4 生物信息学常用工具介绍19-20 1.6 挖掘抗菌肽基因20-24
1.6.1 现有的挖掘手段以及存在的问题20-21
1.6.2 海量植物基因组序列为抗菌肽基因的大规模发掘提供了平台21-24 1.7 研究意义24-25 1.8 研究内容25-26
1.8.1 抗菌肽相关基因的生物信息学预测分析和筛选25
1.8.2 抗菌肽进行超家族的分类和进化分析25-26
1.8.3 对具有强抑菌活性新型抗菌肽进行筛选验证26 1.9 前景展望26-282 研究材料28-33 2.1 菌株28 2.2 质粒28-29 2.3 主要仪器和设备29 2.4 主要试剂29 2.5 主要分子生物学数据库和软件29-30 2.6 主要试剂配置30-333 研究方法33-38 3.1 抗菌肽基因的筛选33-34 3.2 抗菌肽基因的合成34 3.3 融合表达载体的构建34-35 3.4 抗菌肽基因BnLTP2的表达与纯化35 3.5 抗菌肽抑制细菌的活性检测35-36 3.6 抗菌肽抑制真菌的活性检测36 3.7 抗菌肽抑制酵母菌的活性检测36-37 3.8 圆二色谱分析抗菌肽BnLTP2的结构特征37-384 结果与分析38-46 4.1 油菜抗菌肽的序列分析38-39 4.2 油菜中抗菌肽基因的生物信息学分析39-40 4.3 融合蛋白表达载体pET30a-EDDIE-GFP的构建40-42 4.4 抗菌肽基因的人工合成与表达42 4.5 抗菌肽抑制细菌的活性检测42-43 4.6 抗菌肽抑制真菌的活性检测43-44 4.7 抗菌肽抑制酵母菌的活性检测44 4.8 圆二色谱分析抗菌肽BnLTP2的结构特征44-465 结论与讨论46-50 5.1 抗菌肽基因的快速筛选47 5.2 抗菌肽基因的合成与纯化47-48 5.3 抗菌肽的作用机制48-50参考文献50-52附录52-53致谢53
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