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&&反应工程中转化率、产率、收率、选择性如何从色谱计算
反应工程中转化率、产率、收率、选择性如何从色谱计算
各位虫友大家好！小弟最近刚开始做实验，遇到一些不解的地方，想和各位交流！是关于色谱分析后如何从中计算转化率、产率、收率、选择性等一系列问题！我看了很多关于这方面的帖子和相关书籍，但是还是没有彻底搞明白！
转化率还好，从色谱中比较容易计算！
产率和收率有什么区别，有人说什么实际量除以理论量，也有说两者没什么区别，也有说称量产物的质量，再除以一共消耗原料的质量，有的文献中产率可以超过100%，关于这个问题小弟一直没有一个准确的概念！
选择性：比如说产物有A BCD四种物质，B是目的产物，那么其选择性就等于B/（Ａ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｄ）？这里面的数值直接可以用色谱中的百分含量吗？还是说称量完产物的质量，再乘以相对百分含量，再计算？
　　　　各位虫友，专家，谁能把这个问题给小弟详细的解释一下！小弟拜谢～～～～～～～
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补充材料---提高初级、次级代谢产物产量的方法
导读：第二节提高初级代谢产物产量的方法，初级和次级代谢产物在遗传控制、合成途径等方面存在差异的，因而获得发酵过量生产的方法也不同，由于次级代谢产物的合成远离初级代谢的主要途径，基因型改变后的产量变异幅度也较大，而初级代谢产物则与此相反，这在选择提高代谢产物方法时应予考虑，提高初级代谢产物产量的方法主要有以下几种：，因此向培养基中加入诱导物就会增加胞外酶的产量，这就是经常采用的方法，产品的体积生产率仍第二节
提高初级代谢产物产量的方法 我们知道，初级和次级代谢产物在遗传控制、合成途径等方面存在差异的，因而获得发酵过量生产的方法也不同。由于次级代谢产物的合成远离初级代谢的主要途径，微生物细胞对其合成控制较弱，因此，改变环境条件易于影响其表达，基因型改变后的产量变异幅度也较大，而初级代谢产物则与此相反。这在选择提高代谢产物方法时应予考虑。提高初级代谢产物产量的方法主要有以下几种： 1.使用诱导物
与糖类和蛋白质降解有关的水解酶类大都属诱导酶类，因此向培养基中加入诱导物就会增加胞外酶的产量。如加入槐糖（1，2-β-D-葡二糖）诱导木霉菌的纤维素酶的生成，木糖诱导半纤维素酶和葡萄糖异构酶的生成等。但诱导物的价格往往比较贵，经济上未必合算。加入廉价的含有诱导物的原料，如槐豆荚等某些种籽皮中含有槐糖，玉米芯富含木聚糖，培养过程中可陆续被水解产生槐糖、木糖，这就是经常采用的方法。但是，玉米芯等这类不溶性聚合物的***过程缓慢，以其唯一碳源时，培养周期比较长，产品的体积生产率仍难大幅度提高。可考虑先使微生物在廉价的可溶性碳源中迅速生长，形成大量菌体后，再加入诱导物诱导水解酶类生成的方法。 诱导物的浓度过高及能被迅速利用时，也会发生酶合成的阻遏，这在纤维二糖对纤维素酶的产生，对二糖对半纤维素酶生产中都已观察到，这也是使用诱导物时应予注意的。 2.除去诱导物——选育组成型产生菌 在发酵工业中，要选择到一种廉价、高效的诱导物是不容易的，分批限量加入诱导物在工艺上也多不便，更为有效的方法是改变菌株的遗传特性，除去对诱导物的需要，即选育组成型突变株。通过诱变处理，使调节基因发生突变，不产生有活性的阻遏蛋白，或者操纵基因发生突变不再能与阻遏物相结合，都可达到此目的。迄今尚未见由于结构基因发生改变而得到组成型的报道。 已设计出多种选育组成型突变株的方法，其主要原则是创造一种利于组成型菌株生长而不利于诱导型菌株生长的培养条件，造成对组成型的选择优势以及适当的识别两类菌落的方法，从而把产生的组成型突变株选择出来。例如把大肠杆菌半乳糖苷酶的诱导型菌株经诱变处理后，先后含乳糖的培养基中培养，由于组成型突变株半乳糖苷酶的合成不需诱导即能产生，因此可较诱导型的出发菌株较早开始生长，在一定时期内菌数的增加便较快，如持续进行培养时，由于诱导酶形成后，原菌株生长速率亦逐渐增加，这种选择性造成的差别就会减少，可用交替在乳糖、葡萄糖 1 培养基中进行培养的方法。两者利用葡萄糖时的生长速率是相同的，乳糖为碳源造成的组成型菌株的优势生长会持续下去，最后由平板分离就易于得到组成型突变株。以乳糖为限制性生长因子进行连续培养时，生长速率较低的诱导型菌株就会被冲洗掉，也是利用了上述原理。诱导型菌株不经诱变处理，利用其自发突变，用连续培养方法，也能得到组成型突变株。 在平板上识别组成型突变株的方法，主要是利用在无诱导物存在时进行培养，它能产生酶，加入适当的底物进行反应显示酶活加以识别。经常使用酶解后可以有颜色变化的底物，便于迅速检出组成型菌落。如甘油培养基平板中培养大肠杆菌时，诱导型菌株不产酶，组成型菌株可产生半乳糖苷酶。菌落长出后喷布邻硝基苯半乳糖苷，组成型菌株的菌落由于能水解它而呈现硝基苯的***，诱导型则无颜色变化。另如羧甲基纤维素被内切纤维素酶水解后，由于暴露出更多的还原性末端而能被刚果红所染色。可由此方便地检出纤维素酶产生菌。 3.降解***代谢产物浓度，减少阻遏的发生 高分子的多糖、蛋白质等的***代谢产物（如能被迅速利用的单糖、氨基酸以及脂肪酸、磷酸盐）都会阻遏***其聚合物的水解酶类的生成。因此用限量流加这类物质或改用难以被水解的底物的方法，都可减少阻遏作用的发生，而获得较高的酶产量。但是由于它并未改变产生菌的遗传特性，只是暂时改变了酶的合成速率，因此结果往往不稳定。更有效的方法是筛选抗降解物阻遏的突变株。 4.解除***代谢阻遏——筛选抗***代谢阻遏突变株 从遗传学角度来考虑，如调节基因发生突变，使产生的阻遏蛋白失活，不能与末端***代谢产物结合，或操纵基因发生使阻遏蛋白不能与其结合，都能获得抗***代谢阻遏的突变株。前者为隐性突变，后者为显性突变，都能由此导致酶的过量产生。 可以直接以末端代谢产物为底物来筛选抗阻遏突变株，如以葡萄糖、甘油为碳源筛选纤维素酶抗阻遏突变株。但更多地是利用选育结构类似物抗性菌株的方法。 它所依据的机制是，结构类似物由于在分子结构上与***代谢的末端产物相类似，因此它能与阻遏蛋白相结合，如调节基因发生突变而使阻遏蛋白不能与结构类似物结合，即出现抗性菌株。由于分子结构上的类似，这种抗性菌株产生的阻遏蛋白也不能与正常的***代谢产物相结合，即同时也具有对相应的***代谢产物阻遏作用的抗性，而能导致相应酶类的过量生产。 由于结构类似物与正常代谢产物结构上的差异，它与阻遏蛋白的结合往往是不可逆的。氨基酸类的结构类似物也不能用以合成具有正常功能的蛋白质，因此它在 2 细胞中会达到较高的浓度。这都是用结构类似物为底物筛选抗阻遏菌株，较之用正常的***代谢末端产物更为有效的原因。 如果结构类似物与调节酶相结合，所获得的便是抗反馈抑制的抗性菌株。筛选抗阻遏和抗反馈的双重突变则更易于获得高产菌株。对一末端产物的生成途径了解的愈加清楚，就能定向选育多重突变株，而得到过量生产。菌株选育中常用的结构类似物列于表4-1。表中的类似物未区分其在作用机制上是抗阻遏或抗反馈，这是由于有的作用机制尚未完全弄清楚，有的则因菌种而异。 有些酶的合成可为铵盐、磷酸盐类所阻遏，用筛选对这类化合物的结构类似物有抗性的突变株的方法，也可达到脱阻遏的效果。如构巣曲霉的蛋白酶的合成可为铵盐所阻遏，筛选抗甲基铵盐的抗性突变株，其蛋白酶合成即不为铵盐所阻遏。 表4-1 结构类似物及代谢末端产物 末端产物 精氨酸 苯丙氨酸 酪氨酸 色氨酸 蛋氨酸 脯氨酸 缬氨酸 对氨基苯甲氨酸 腺苷酸 葡萄糖 蔗糖、麦芽糖
5.解除反馈抑制——筛选抗反馈抑制菌株
如上所述，在生物合成途径中广泛存在着反馈抑制调节——末端产物抑制合成途径（包括分歧途径）中第一个酶的活力，因此，降低末端产物的浓度就能积累代谢途径中间体，如同培养基中去除阻遏物一样，这种方法的实施比较困难，比较有效的方法是选育对末端产物有抗性的突变株。如天门冬氨酸激酶是赖氨酸生物合成结构类似物 D-豆氨酸，D-精氨酸 对氟苯丙氨酸，噻吩丙氨酸 对氟苯丙氨酸，D-酪氨酸 5-甲基色氨酸，6-甲基色氨酸 乙硫氨酸，N-乙酰亮氨酸 3，4-二氢脯氨酸，磺胺胍 α-氨基丁酸 磺胺 2-氟腺嘌呤 2-脱氧葡萄糖 2-脱氧棉籽糖 可过量生产的产物 精氨酸 苯丙氨酸 酪氨酸 色氨酸 蛋氨酸 脯氨酸 缬氨酸 对氨基苯甲氨酸 腺苷酸 β-葡萄糖苷酶 蔗糖酶 纤维素酶 纤维二糖、葡萄糖 甘油
3 途径中的调节酶，有***短杆菌分离到对赖氨酸的类似物（ε-氨基半胱氨酸）有抗性的突变株，它对天冬氨酸激酶的反馈抑制不敏感，赖氨酸的产量可达57mg/ml。 解除反馈抑制的另一种方法是选育营养缺陷型。即筛选丧失了合成途径中某种酶，而必需提供某一中间代谢产物才能生长的突变株。限量供给此中间产物就能降低或解除末端产物的反馈抑制，而获得另一种间产物的过量生产。这在较简单的直线式合成途径中，已获得不少成功的实例。 谷氨酸经过乙酰谷氨酸、鸟氨酸、瓜氨酸而合成精氨酸（图4-7）。经诱变处理后得到的瓜氨酸营养缺陷型失去了催化鸟氨酸合成瓜氨酸的鸟氨酸转氨甲酰酶的能力，必需供给瓜氨酸或精氨酸时，此菌才能生长。控制供给适当的精氨酸或瓜氨酸，使菌体生长，但又不知引起反馈抑制时（精氨酸抑制N-乙酰谷氨酸酶活力），就能使鸟氨酸大量产生。如选育丧失精氨酸琥珀酸合成酶的精氨酸缺陷型，就能得到瓜氨酸的过量生产。 上述的直线式合成途径中，用营养缺陷型方法只能使中间代谢产物积累而不能使末端产物积累。在分歧途径中则能得到使末端产物过量产生的营养缺陷型突变。谷氨酸棒杆菌的苏氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸和赖氨酸的合成是与分歧代谢途径相联系的（图4-8），筛选高丝氨酸营养缺陷型后，限量供给苏氨酸时，就能解除由苏氨酸和赖氨酸的协同反馈抑制作用而获得赖氨酸的过量生产。这是因为仅有赖氨酸或苏氨酸存在时，天冬氨酸激酶不被抑制，只有两者的协同效应才能造成抑制。在限量供给苏氨酸的情况下，即使赖氨酸过剩，抑制作用也很难发生。
4 葡萄糖 谷氨酸 天冬氨酸 N-乙酰谷氨酸 N-乙酰谷氨酸激酶 N-乙酰谷氨酰磷酸 天冬氨酰半醛 协同反馈 天冬氨酸激酶 天冬氨酰磷酸 鸟氨酸 反馈抑制高丝氨酸 蛋氨酸 苏氨酸
瓜氨酸 赖氨酸 精氨酸 图 4-7 谷氨酸棒杆菌的精氨酸合成途径 异亮氨酸 图4-8 由天冬氨酸合成苏氨酸、蛋氨酸和赖氨酸的途径
6.防止回复突变的产生和筛选负突变菌株的回复突变菌株 经诱变产生的高产菌株，在生产过程中易于发生回复突变，使生产不稳定。双重营养缺陷型发生回复突变的机率较小，易于获得遗传性较稳定的菌株。如筛选得到的是抗结构类似物的高产菌株，可在培养液中加入适当结构类似物，以防止回复突变株的增殖。利用高产株和回复突变对抗生素敏感性的不同，加适量抗生素防止回复株增殖，也是一类方法。 负突变株的回复突变株亦可用来提高代谢产物的过量产生。 在无阻遏物或末端代谢产物存在的条件下选育不产酶的负变株，继续进行诱变后转接在阻遏物或末端产物存在的条件下筛选产酶突变株，有可能获得高产菌株。对其机制尚缺少深入的研究。有的研究结果表明，抗阻遏突变株是启动基因突变得结果，抗反馈突变株是调节酶的变构中心发生了改变而催化中心未改变。 7.改变细胞膜的通透性 微生物细胞吸收作为代谢所需要的底物和离子是依靠定位在细胞膜上的主动运输系统来进行，与产能代谢过程相偶联。运输系统有高度的专一性，这主要取决于其蛋白质的组成，即透性酶。透性酶的合成与由其输送的酶类一样也受调节控制。细胞质膜和细胞壁的结构也影响物质的进出。当控制物理、化学条件或者筛选细胞膜、细胞壁结构组成的突变株以改进物质的进出速率，影响代谢过程时，都有可能造成代谢产物过量生产。
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