[叶绿素含量测定]叶绿素含量测定
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篇一 : 叶绿素含量测定叶绿素含量的测定(分光光度法)根据朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律，某有色溶液的吸光度A值与其中溶质浓度C以及光径L成正比，即A＝aCL（a为该物质的吸光系数）。［）各种有色物质溶液在不同波长下的吸光值可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下的吸光度的总和，这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素提取液中叶绿素a、b含量，只需测定该提取液在2 个特定波长下的吸光度度值，并根据叶绿素a与b在该波长下的吸光系数即可求出各自的浓度。在测定叶绿素a、b含量时，为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长应选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。已知叶绿素a、b的80 ％丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm 和645nm，又知在波长663nm下，叶绿素a、b在该溶液中的比吸收系数分别为82.04 和9.27，在波长645nm下分别为16.75和45.60，可根据加和性原则列出以下关系式：A663=82.04Ca +9.27Cb………………(1)A645=16.75Ca+45.6Cb………………(2)式中A663、A664分别为波长663nm和645nm处测定叶绿素溶液的吸光度值；Ca、Cb分别为叶绿素a、b的浓度(g/L)。解联立方程(1)、(2)可得以下方程：Ca=0..…………(3)Cb=0..…………(4)如把叶绿素含量单位由g/L改为mg/L，(3)、(4)式则可改写为：Ca(mg/L)=12.7A663-2.69A645…………(5)Cb(mg/L)=22.9A645-4.68A663…………(6)叶绿素总量CT(mg/L)=Ca+Cb=20.2A645+8.02A663……(7)叶绿素总量也可根据下式求导A652=34.5×CT由于652nm为叶绿素a与b在红光区吸收光谱曲线的交叉点(等吸收点)，两者有相同的比吸收系数（均为 34.5 ），因此也可以在此波长下测定一次吸光度（A652）求出叶绿素总量：CT(g/L)=A652/34.5CT(mg/L)=A652×………(8)因此，可利用(5)、(6)式可分别计算叶绿素a与b含量，利用(7)式或(8)式可计算叶绿素总量。一、仪器、药品与材料（一）实验材料叶绿素含量 叶绿素含量测定不同生境的新鲜植物叶片。（）（二）仪器与用品分光光度计，天平（感量0.01g）， 研钵，漏斗，量筒，滤纸等。（三）试剂１．丙酮。2．80％丙酮：取80 mL纯丙酮加入20 mL蒸馏水混匀即得。3．石英砂。4．无水CaCO3。二、实验步骤1．叶绿体色素溶液提取：选取不同生境下生长植物的成熟叶片按照实验七-I中方法用80%丙酮进行提取。2．测定吸光度值：以80%丙酮作为参比溶液，分别在652nm、663nm和645nm处测定叶绿体色素提取液（浓度大时需稀释）的光吸收值。3．计算：把测得的光吸收值代入上述5、6、7 和8等公式计算出叶绿素a、b和叶绿素总量。在计算时需要考虑稀释因子。一、材料、仪器、药品1．材料：植物绿色叶片。在本实验中利用光合速率测定实验中取回室内的绿色半叶和***半叶为试材。2．仪器：(1) 分光光度计；（2）天平；(3) 研钵；(4) 滤纸；(5) 漏斗；(6) 5ml移液管；(7) 打孔器；（8）滴管；（9）剪刀；（10）25ml容量瓶；（11）毛刷；（12）擦镜纸。二、方法1．取样：用毛笔或毛刷清除叶片表面的灰尘，用打孔器从绿叶和黄叶上各打取0.25dm-2的叶圆片，立即称重，剪碎后放入研钵中。（在正规实验中应各重复3次，本实验为减少丙酮向环境中的排放，故不设重复）。注意取样时要避开大的叶脉。如果需要计算叶片干样叶绿素含量，另取一份相同样品置于烘箱中烘干，用于测定干重。2．研磨提取：向研钵中加入80%丙酮2.5ml，以及少许CaCO3 (中和酸性，防止叶绿素酯酶***叶绿素) 和石英砂，研磨成匀浆，再加入3ml 80%丙酮，继续研磨至组织变白，在暗处静止3～5min后，用一层干滤纸过滤到25ml容量瓶中，用滴管吸取80%丙酮将研钵洗净，清洗液也要过滤到容量瓶中，并用80%丙酮沿滤纸的周围洗脱色素，待滤纸和残渣全部变白后，用80%丙酮定容至刻度。3．读取吸光度：取厚度为lcm的洁净比色皿，注意不要用手接触比色皿的光面，先用少量色素提取液清洗2～3次，注意清洗时要使清洗液接触比色皿内壁的所有部分，然后将色素提取液倒入比色皿中，液面高度约为比色皿高度的4/5，将撒在比色皿外面的溶液用滤纸吸掉（注意不能擦），再用擦镜纸擦干擦净。将比色皿放入仪器的比色皿架上，注意不要将溶液撒入仪器内。第一个位置放盛有80%丙酮的比色皿，做为空白对照。将仪器波长分别调至663、645、652nm处，以80%丙酮做为空白对照调透光率100%，分别测定溶液在上述三个波长下的吸光叶绿素含量 叶绿素含量测定度。[)每个样品重复测定3次。注意，每次在转换波长时，都要用80%丙酮调透光率100%。4．结果计算：将645、663、652nm处测得的吸光度代入公式（3）、（4）、（5）、（6）中计算叶绿素a、b浓度和总浓度。再将叶绿素a、b浓度和总浓度代入公式（7）中求出所测材料单位重量或单位面积的叶绿素a、b含量和总含量。三、实验结果记录1．实验材料：植物名称：种植地点：发育时期：试验处理：植物的生长状况：取样时间：取样部位及数量：2．测定地点：3．测定时间： 年 月 日 时 分 至 时 分4．测定条件记录：5．数据记录及结果记载：篇二 : 叶绿素a测定实验三 富营养化湖中藻量的测定（叶绿素a法）一、实验目的富营养化湖由于水体受到污染，尤以氮磷为甚，致使其中的藻类旺盛生长。(）此类水体中代表藻类的叶绿素a浓度常大于10微克/升。本实验通过测定不同水体中藻类叶绿素a浓度，以考查其富营养化情况。二、器材与用品1、分光光度计（波长选择大于750nm，精度为0.5－2nm）。2、比色杯（1cm；4cm）。3、台式离心机（3500r/min）4、离心管（15ml具刻度和塞子）；冰箱5、匀浆器或小研钵。6、蔡氏滤器；滤膜（0.45微克，直径47mm）。7、真空泵（最大压力不超过300kpa）。8、MgCO3悬液：lg MgCO3细粉悬于100ml蒸馏水中。 9、90％的丙酮溶液：90份丙酮＋10份蒸馏水。10、水样：两种不同污染程度的湖水水样各2L.三、方法和步骤叶绿素a 叶绿素a测定1、按浮游植物采样方法，湖泊、水库采样500ml，池塘300ml。（）采样点及采水时间同“浮游植物”。2、清洗玻璃仪器：整个实验中所使用的玻璃仪器应全部用洗涤剂清洗干净，尤其应避免酸性条件下而引起的叶绿素a***。3、过滤水样；在蔡氏滤器上装好滤膜，每种测定水样取50－500ml减压过滤。待水样剩余若干毫升之前加入0.2ml MgCO3悬液、摇匀直至抽干水样。加入MgCO3可增进藻细胞滞留在滤膜上，同时还可防止提取过程中叶绿素a被***。如过滤后的载藻滤膜不能马上进行提取处理，应将其置于干燥器内，放冷（4℃）暗处保存，放置时间最多不能超过48小时。4、提取；将滤膜放于匀浆器或小研钵内，加2－3ml90％的丙酮溶液，匀浆，以破碎藻细胞。然后用移液管将匀浆液移入刻度离心管中，用5ml90％丙酮冲洗2次，最后向离心管中补加90％丙酮，使管内总体积为10ml。塞紧塞子并在管子外部罩上遮光物，充分振荡，放冰箱避光提取18－24小时。5、离心：提取完毕后，置离心管于台式离心机上3500r/min，离心10min，取出离心管，用移液管将上清液移入刻度离心管中，塞上塞子，3500r/min在离心10min。正确记录提取液的体积。叶绿素a 叶绿素a测定6、测定光密度：藻类叶绿素a具有其独特的吸收光谱（663nm），因此可以用分光光度法测其含量。［）用移液管将提取液移入1cm比色杯中，以90％的丙酮溶液作为空白，分别在750、663、645、630nm波长下测提取液的光密度值（OD）。注意：样品提取的OD663值要求在0.2与1.0之间，如不在此范围内，应调换比色杯，或改变过滤水样量。OD663小于0.2时，应该用较宽的比色杯或增加水样量；OD663大于1.0时，可稀释提取液或减少水样滤过量，使用1cm比色杯比色。7、叶绿素a浓度计算：将样品提取液在663、645、630nm波长下的光密度值（OD663 OD645 OD630）分别减去在750nm下的光密度值（OD750）,，此值为非选择性本底物光吸收校正值。叶绿素a浓度计算公式如下：（1）样品提取液中的叶绿素a浓度Ca为：Ca(微克/升)＝11.64（OD663－OD750）－2.16（OD645－OD750）+0.1（OD630－OD750（1） 水样中叶绿素a浓度为：叶绿素a(微克/升)＝Ca×v/(V×L)（2）叶绿素a(微克/升)＝Ca×v/V×L叶绿素a 叶绿素a测定Ca：样品提取液中叶绿素a浓度(微克/升) v ：90％丙酮提取液体积(ml) V：过滤水样的体积（L） L：比色杯宽度（cm） 四、实验报告将测定结果记录于表4－1中表4－1 测定结果根据测定结果，参照表4－1中指标评价被测水样的富营养化程度。（）表4－2 湖泊富营养化的叶绿素a评价标准 五、思考题1、比较两种水样中的叶绿素a浓度，通过本实验你的结论是什么？2、如何保证水样叶绿素a浓度测定结果的准确性？主要应注意哪几个方面的问题？叶绿素a 叶绿素a测定［）篇三 : 叶绿素含量测定叶绿素含量的测定(分光光度法)根据朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律，某有色溶液的吸光度A值与其中溶质浓度C以及光径L成正比，即A＝aCL（a为该物质的吸光系数）。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光值可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下的吸光度的总和，这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素提取液中叶绿素a、b含量，只需测定该提取液在2 个特定波长下的吸光度度值，并根据叶绿素a与b在该波长下的吸光系数即可求出各自的浓度。在测定叶绿素a、b含量时，为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长应选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。已知叶绿素a、b的80 ％丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm 和645nm，又知在波长663nm下，叶绿素a、b在该溶液中的比吸收系数分别为82.04 和9.27，在波长645nm下分别为16.75和45.60，可根据加和性原则列出以下关系式：A663=82.04Ca +9.27Cb………………(1)A645=16.75Ca+45.6Cb………………(2)式中A663、A664分别为波长663nm和645nm处测定叶绿素溶液的吸光度值；Ca、Cb分别为叶绿素a、b的浓度(g/L)。解联立方程(1)、(2)可得以下方程：Ca=0..…………(3)Cb=0..…………(4)如把叶绿素含量单位由g/L改为mg/L，(3)、(4)式则可改写为：Ca(mg/L)=12.7A663-2.69A645…………(5)Cb(mg/L)=22.9A645-4.68A663…………(6)叶绿素总量CT(mg/L)=Ca+Cb=20.2A645+8.02A663……(7)叶绿素总量也可根据下式求导A652=34.5×CT由于652nm为叶绿素a与b在红光区吸收光谱曲线的交叉点(等吸收点)，两者有相同的比吸收系数（均为 34.5 ），因此也可以在此波长下测定一次吸光度（A652）求出叶绿素总量：CT(g/L)=A652/34.5CT(mg/L)=A652×………(8)因此，可利用(5)、(6)式可分别计算叶绿素a与b含量，利用(7)式或(8)式可计算叶绿素总量。一、仪器、药品与材料（一）实验材料不同生境的新鲜植物叶片。（二）仪器与用品分光光度计，天平（感量0.01g）， 研钵，漏斗，量筒，滤纸等。（三）试剂１．丙酮。2．80％丙酮：取80 mL纯丙酮加入20 mL蒸馏水混匀即得。3．石英砂。4．无水CaCO3。二、实验步骤1．叶绿体色素溶液提取：选取不同生境下生长植物的成熟叶片按照实验七-I中方法用80%丙酮进行提取。2．测定吸光度值：以80%丙酮作为参比溶液，分别在652nm、663nm和645nm处测定叶绿体色素提取液（浓度大时需稀释）的光吸收值。3．计算：把测得的光吸收值代入上述5、6、7 和8等公式计算出叶绿素a、b和叶绿素总量。在计算时需要考虑稀释因子。一、材料、仪器、药品1．材料：植物绿色叶片。在本实验中利用光合速率测定实验中取回室内的绿色半叶和***半叶为试材。2．仪器：(1) 分光光度计；（2）天平；(3) 研钵；(4) 滤纸；(5) 漏斗；(6) 5ml移液管；(7) 打孔器；（8）滴管；（9）剪刀；（10）25ml容量瓶；（11）毛刷；（12）擦镜纸。二、方法1．取样：用毛笔或毛刷清除叶片表面的灰尘，用打孔器从绿叶和黄叶上各打取0.25dm-2的叶圆片，立即称重，剪碎后放入研钵中。（在正规实验中应各重复3次，本实验为减少丙酮向环境中的排放，故不设重复）。注意取样时要避开大的叶脉。如果需要计算叶片干样叶绿素含量，另取一份相同样品置于烘箱中烘干，用于测定干重。2．研磨提取：向研钵中加入80%丙酮2.5ml，以及少许CaCO3 (中和酸性，防止叶绿素酯酶***叶绿素) 和石英砂，研磨成匀浆，再加入3ml 80%丙酮，继续研磨至组织变白，在暗处静止3～5min后，用一层干滤纸过滤到25ml容量瓶中，用滴管吸取80%丙酮将研钵洗净，清洗液也要过滤到容量瓶中，并用80%丙酮沿滤纸的周围洗脱色素，待滤纸和残渣全部变白后，用80%丙酮定容至刻度。3．读取吸光度：取厚度为lcm的洁净比色皿，注意不要用手接触比色皿的光面，先用少量色素提取液清洗2～3次，注意清洗时要使清洗液接触比色皿内壁的所有部分，然后将色素提取液倒入比色皿中，液面高度约为比色皿高度的4/5，将撒在比色皿外面的溶液用滤纸吸掉（注意不能擦），再用擦镜纸擦干擦净。将比色皿放入仪器的比色皿架上，注意不要将溶液撒入仪器内。第一个位置放盛有80%丙酮的比色皿，做为空白对照。将仪器波长分别调至663、645、652nm处，以80%丙酮做为空白对照调透光率100%，分别测定溶液在上述三个波长下的吸光度。每个样品重复测定3次。注意，每次在转换波长时，都要用80%丙酮调透光率100%。4．结果计算：将645、663、652nm处测得的吸光度代入公式（3）、（4）、（5）、（6）中计算叶绿素a、b浓度和总浓度。再将叶绿素a、b浓度和总浓度代入公式（7）中求出所测材料单位重量或单位面积的叶绿素a、b含量和总含量。三、实验结果记录1．实验材料：植物名称：种植地点：发育时期：试验处理：植物的生长状况：取样时间：取样部位及数量：2．测定地点：3．测定时间： 年 月 日 时 分 至 时 分4．测定条件记录：5．数据记录及结果记载：篇四 : 叶绿素a与叶绿素b含量的测定叶绿素a与叶绿素 含量的测定 叶绿素 与叶绿素b含量的测定 与叶绿素实验目的和意义? 叶绿素a与叶绿素b是高等植物叶绿体色素的重 要组分，约占到叶绿体色素总量的75%左右。 叶绿素在光合作用中起到吸收光能、传递光能 的作用(少量的叶绿素a还具有光能转换的作用)， 因此叶绿素的含量与植物的光合速率密切相关， 在一定范围内，光合速率随叶绿素含量的增加 而升高。另外，叶绿素的含量是植物生长状态 的一个反映，一些环境因素如干旱、盐渍、低 温、大气污染、元素缺乏都可以影响叶绿素的 含量与组成，并因之影响植物的光合速率。因 此叶绿素含量a与叶绿素b含量的测定对植物的 光合生理与逆境生理具有重要意义。实验原理? 叶绿素提取液中同时含有叶绿素a和叶绿素b， 二者的吸收光谱虽有不同，但又存在着明显的 重叠，在不分离叶绿素a和叶绿素b的情况下同 时测定叶绿素a和叶绿素b的浓度，可分别测定 在663nm和645nm（分别是叶绿素a和叶绿素b 在红光区的吸收峰）的光吸收，然后根据 Lambert-Beer定律，计算出提取液中叶绿素a和 叶绿素b的浓度。 ? A663=82.04Ca+9.27Cb （1） ? A645=16.75Ca+45.60Cb （2）? 公式中Ca为叶绿素a的浓度，Cb为叶绿素 b浓度（单位为g/L），82.04和9.27 分 别是叶绿素a和叶绿素b在663nm下的比吸 收系数（浓度为1g/L，光路宽度为1cm时 的吸光度值）；16.75和45.60分别是叶绿 素a和叶绿素b在645nm下的比吸收系数。 即混合液在某一波长下的光吸收等于各 组分在此波长下的光吸收之和。将上式整理，可以得到下式： Ca=0.. （3） Cb=0.. （4） 将叶绿素的浓度改为mg/L，则上式变为： Ca=12.7A663-2.69A645 （5） Cb=22.9A645-4.68A663 （6） CT=Ca+Cb=8.02A663+20.21A645 （7） CT为叶绿素的总浓度实验仪器及材料? 实验材料 实验材料：- 菠菜或其它绿色植物? 实验仪器及试剂： 实验仪器及试剂- UV-1700分光光度计；天平；剪刀；打孔器； 研钵；移液管；漏斗；量筒；培养皿；滤纸； 丙酮；石英砂；CaCO3；实验步骤1. 提取叶绿素选取有代表性的菠菜叶片数张，于天平上称取0.5g， （也可用打孔器打取一定数量的叶圆片，计算总 的叶面积），剪碎后置于研体中，加入5ml 80%丙 酮，少许CaCO3和石英砂。仔细研磨成匀浆，用 滤斗过滤到10ml量筒中，注意在研钵中加入少量 80%丙酮将研钵洗净，一并转入研钵中过滤到量 筒内，并定容至10ml。将量筒内的提取液混匀， 用移液管小心抽取5ml转入25ml量筒中，再加入 80%丙酮定容至25ml（最终植物材料与提取液的 比例为W：V＝0.5：50＝1：100，叶色深的植物 材料比例要稀释到1：200）。2. 测量光吸收利用722分光光度计或UV1700分光光度计，分 别测定叶绿素提取液在645nm和663nm下的 吸光度。结果分析将测得的数值代入到公式（5）（6）（7） 中，计算出叶绿素a、叶绿素b和总叶绿 素的浓度。最后要计算出单位叶片鲜重 中叶绿素的含量：叶绿素 a 含量 (mg/g 鲜重 ) ＝ Ca×50ml（总体积 数）×1ml/1000ml/L ÷0.5g=0.1Ca 叶绿素b含量(mg/g鲜重)＝0.1Cb 总叶绿素含量(mg/g鲜重)＝0.1CT讨论： 讨论1． 叶绿素在兰光区的吸收峰高于红光区 的吸收峰，为何不用兰光区的光吸收来 测定叶绿素的含量。 2． 计算叶绿素a与叶绿素b含量的比值， 2 a b 可以得到什么结论？ 3． 比较阳生植物和阴生植物的叶绿素a和 叶绿素b的含量以及比例，可以得到什么 结论？篇五 : 分光光度法测定叶绿素含量23一、实验目的1.了解植物组织中叶绿素的分布及性质。2.掌握测定叶绿素含量的原理和方法。二、实验原理叶绿素广泛存在于果蔬等绿色植物组织中，并在植物细胞中与蛋白质结合成叶绿体。当植物细胞死亡后，叶绿素即游离出来，游离叶绿素很不稳定，对光、热较敏感；在酸性条件下叶绿素生成绿褐色的脱镁叶绿素，在稀碱液中可水解成鲜绿色的叶绿酸盐以及叶绿醇和甲醇。高等植物中叶绿素有两种：叶绿素a 和b，两者均易溶于乙醇、***、丙酮和氯仿。 叶绿素的含量测定方法有多种，其中主要有：1.原子吸收光谱法：通过测定镁元素的含量，进而间接计算叶绿素的含量。2.分光光度法：利用分光光度计测定叶绿素提取液在最大吸收波长下的吸光值，即可用朗伯--比尔定律计算出提取液中各色素的含量。叶绿素a 和叶绿素b 在645nm 和663nm 处有最大吸收，且两吸收曲线相交于652nm 处。因此测定提取液在645nm、663nm、652nm 波长下的吸光值，并根据经验公式可分别计算出叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素的含量。三、仪器、原料和试剂仪器分光光度计、电子顶载天平(感量0．01g)、研钵、棕色容量瓶、小漏斗、定量滤纸、吸水纸、擦境纸、滴管。原料新鲜(或烘干)的植物叶片试剂1. 96％乙醇(或80％丙酮) 2. 石英砂3. 碳酸钙粉四、操作步骤取新鲜植物叶片(或其它绿色组织)或干材料，擦净组织表面污物，去除中脉剪碎。称取剪碎的新鲜样品2g，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及3mL95％乙醇，研成均浆，再加乙醇10mL，继续研磨至组织变白。静置3～5min。取滤纸1张置于漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗，滤液流至100mL 棕色容量瓶中；用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至100mL，摇匀。取叶绿体色素提取液在波长665nm、645nm 和652nm 下测定吸光度，以95％乙醇为空白对照。五、计算按照实验原理中提供的经验公式，分别计算植物材料中叶绿素a、b 和总叶绿素的含量 叶绿素a= （12.7 A665 -2.69 A645）×叶绿素b=（12.7 A645 - 2.69A665）× V1000?WV1000?WV1000?W 总叶绿素a=（20.0A645 + 8.02 A665 ）×或总叶绿素a= A65234.5?V1000?W几种叶绿素含量测定方法比较叶绿素含量是植物生长过程中一个重要的生理指标,由于其对周围环境很敏感,并与植物的光合作用、营养吸收等密切相关,被广泛作为植物生长的常规测定指标项目。叶绿素含量的测定方法有多种,在国际上以传统的Arnon法(也称研磨法)应用最为广泛。但该法需要把植物材料研磨并经转移、过滤或离心处理,不仅工作量大,而且不可避免地使试验人员较长时间与挥发于空气中的试剂相接触,对人体损害较大。近年来,直接浸取法受到重视,张宪政等用不同配比的混合液对叶绿素进行提取,证明了用混合液提取的可行性。李得孝,吴志旭等对传统的Arnon法进行了改进,将样品冷冻处理后,用50℃丙酮静置提取并进行测定,极大提高了工作效率。(1)研磨法。称取0. 5 g样品于研钵内,加入少量CaCO3和5 mL 80%的丙酮,将材料充分研磨细碎直至变白(约5 min),转移至10 mL具塞离心管中,定容至刻度,摇匀后置于4℃冰箱中静置12 h,离心10 min (2000 r/min),取上清液测定。(2)直接浸取法。称取0. 5 g样品放入10 mL具塞离心管中,用80%丙酮定容至刻度,于暗柜中静置72 h浸取,取上清液测定。(3)样品冷冻后用50℃提取液提取法。称取0. 5 g样品于10 mL具塞离心管中,置冰箱中冷冻2h,取出后加入10mL在水浴锅中加热至50℃的80%丙酮,充分振摇后于暗柜中静置4h,取上清液测定。（4）叶绿素计法：叶绿素计是所有方法中最快捷的，你只需手持叶绿素计，将叶片插入仪器的感应部位，然后合上测量探头即可。应用于这种测定的仪器又被叫做便携式叶绿素仪，因为该叶绿素计拥有小巧的机身，仅200g的重量，可以方便地装入口袋并带到现场进行测量。在以上几种测定方法中，直接浸取法提取效果最好,但耗时长,传统研磨法叶绿素的损失较大,冷冻后用50℃提取液提取法操作简便且提取速度较快,在提取率和稳定性方面均显示良好的优越性。冷冻后用50℃提取液提取法的最优试验条件为将试验材料冷冻1 h后,静置提取3 h。而叶绿素仪法，则相较于其他三种化学方法，更加快速方便。而且用SPAD-502测定叶绿素含量时，不会对叶片造成损伤，这也是使用叶绿素计的另一大好处。因为你不需要摘下叶片，直接用仪器夹住叶片测定即可，这样就可以在作物的生长过程中全程对特定的叶片进行监测，从而得到更科学的分析结果。
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