空心菜——留种技术要领_农业_中国百科网
空心菜——留种技术要领
    空心菜留种要选择瘦地、高爽地作为留种田，因土壤肥沃，茎叶生长旺盛，会推迟开花期，一旦早霜来临，茎叶枯死，种子就不能成熟。留种秧苗的栽植时间稍晚于大田，一般在5月下旬到6月初，行距为1米、株距0.6米，每穴2株。秧苗栽植后，不需要追肥浇水，但搭棚要早，最好在活棵后搭“人”字棚，将主茎引到棚上去，以后要陆续将侧枝引上棚。留种期间要注意红蜘蛛的危害，及时防治。在正常情况下，8月下旬可开花，10月下旬种子开始成熟。成熟的种子外壳黑色，质地干硬，即可采收。种子成熟一批采收一批，以提高种子质量。一般在11月上、中旬，降霜前收完。种子采收后要立即晒干后再贮存。
收录时间:日 16:01:26 来源:中国农业推广网 作者:匿名
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一种藤蕹组织培养的方法
【专利摘要】本发明提供了一种藤蕹组织培养的方法，包括：A)获得茎段至少带有1个未萌发腋芽的藤蕹藤条；B)初代培养，初代培养基为MS培养基+2.0-3.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤+0.1-0.3mg/L萘乙酸+30g/L碳源+6g/L的琼脂粉，pH值为5.5-5.8；C)继代培养继代培养基为MS培养基+0.5-1.5mg/L6-苄氨基腺嘌呤+0.3-0.7mg/L赤霉素+30g/L碳源+6g/L琼脂粉，pH值为5.5-5.8；D)生根培养，生根培养基为1/2MS培养基+0.3-0.6mg/L萘乙酸+15g/L碳源+6g/L琼脂粉，pH值为5.5-5.8；E)将已生根的组培苗进行炼苗。
【专利说明】一种藤蕹组织培养的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物组织培养领域，特别涉及一种藤蕹组织培养的方法。
【背景技术】
[0002]蕹菜(Lpomoeaaquatica)属旋花科(Convolvulaceae)甘薯属(Lpomoea)的一年生或多年生草本植物，又名竹叶菜、空心菜、通心菜等，原产于我国热带多雨地区，具有生长速度快、产量高、采收期长、耐高温高湿、抗性强、病虫害较少等优点，在我国长江流域及以南地区普遍栽培，为夏秋季重要叶类蔬菜之一，既有很高的营养价值，又有清热解毒、利尿除湿、降低血糖等药用价值。蕹菜分籽蕹和藤蕹两种，藤蕹品质较子蕹更佳，特别是长沙藤蕹，茎蔓生、节间短中空、茎杆粗壮、耐热性好、质地更为柔嫩，生长期更长，产量更高，更深得人们的喜爱。
[0003]近年来，虽然藤蕹作为春夏季主要叶菜类蔬菜，具有一定的种植规模，也取得了较好的经济效益，但由于藤蕹在长江流域不开花，难结籽，为无性繁殖的植物，目前生产上主要采取茎蔓扦插繁殖的方法繁育母苗。该方法有不少弊端，严重制约了生产的发展。主要体现在如下几方面:第一，藤蕹无法获得种子，传统留种方式只能选择老茎杆，立秋前重新进行扦插培育组织充实健壮的藤蔓做种蔓，再于初霜前挖取茎蔓贮存于地窖中留种，留种过程需保持10-15°C的低温和75%的空气湿度，翌年春气温达15°C才能取出种蔓育苗，采用此方法费时费力，对生长环境要求严格，种蔓成活率低于80 %。第二，扦插繁殖使藤蕹繁殖速度变慢，通常I根蕹条只能繁殖I株植株，且缓苗时间较长，田间管理较为复杂。第三，无性繁殖的作物都易受到一种或多种病原菌的周身侵染，病原菌的侵染不一定都会造成植株的死亡，很多病毒甚至可能不表现出任何症状，但病毒的存在在会减少作物产量和品质。藤蕹在扦插繁殖过程中同样易造成病毒的积累，导致种质退化，严重影响藤蕹产量、品质和抗性等性状。通过调查，目前藤蕹的病害主要有轮斑病、褐斑病和花叶病毒病等病毒，人们在栽培过程中通常采用药物控制，而忽略更新母苗，既污染环境，又埋下了食品安全隐患。
【发明内容】
[0004]本发明利用植物组织培养技术，提供一种藤蕹组织培养的方法，在短时间内大量生产优质种苗的同时，还能减少病原危害，对推动湖南省这种传统特色蔬菜产业的发展，解决蔬菜淡季供应不足等问题有着十分重要的意义。
[0005]具体地，本发明提供了一种藤蕹组织培养的方法，所述方法包括如下步骤:
[0006]A)预处理:获得藤蕹藤条，流水下冲洗干净，将其剪成3_4cm的茎段，并保证所述茎段中至少带有I个未萌发的腋芽，并对所述茎段表面消毒，例如可以用70%的酒精表面消毒，用无菌水冲洗多次，再用消毒溶液消毒，然后再次用无菌水冲洗多次；
[0007]B)初代培养:接种于初代培养基中培养，所述初代培养基为MS培养基+2.0-3.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤+0.1-0.3mg/L的萘乙酸+30g/L的碳源+6g/L的琼脂粉，pH值范围为5.5-5.8 ；
[0008]C)继代培养:选择初代培养后苗高4cm以上，且具有3_5个腋芽的外植体，剪成带有1-2个腋芽的茎段，接种于继代培养基中培养，待外植体产生的丛生芽长有3-5个腋芽时，分离所述丛生芽，转接至初代培养基中使腋芽伸长，苗高4cm以上后再转接至继代培养基中继续增殖，所述继代培养基为MS培养基+0.5-1.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤+0.3-0.7mg/L的赤霉素+30g/L的碳源+6g/L的琼脂粉，pH值范围为5.5-5.8 ；
[0009]D)生根培养:选择苗高4cm以上，具有3_5个腋芽的外植体，接种于生根培养基中培养，所述生根培养基为1/2MS培养基+0.3-0.6mg/L的萘乙酸+15g/L的碳源+6g/L的琼脂粉，PH值范围为5.5-5.8 ；
[0010]E)选择根据所述步骤D)的苗高4cm以上，具有3_5个腋芽的组培苗，已生根且根系发达的组培苗进行炼苗。
[0011]经实验证实，与侧藤藤条相比，组培时选择主藤藤条做为实验材料，其外植体更易耐受消毒液的侵蚀，生长势更强，因此，在一个优选的实施方式中，藤蕹藤条选自主藤藤条。
[0012]本文中所述的顶芽指生长在植株主干或侧枝顶端的芽。腋芽通常是指着生在叶腋处的芽。在本发明中的腋芽除非特别指出，否则的话，腋芽可以包括顶芽。丛生芽指由植物***和愈伤组织发育而来的群体丛生芽苗，在本发明中指藤蕹茎段基部愈伤化后由愈伤组织分化而形成的簇生状不定芽。外植体是指从活植物体上切取下来进行组织培养的那部分组织或***，具体为含腋芽的藤蕹茎段。
[0013]在一个具体的实施方式中，所述步骤A)中的消毒液为添加吐温20的5%的次氯酸钠溶液或添加吐温20的0.1 %的升萊溶液,且每10mL消毒液中滴入50 μ L即I滴吐温20，消毒时间为5-8分钟。
[0014]在一个具体的实施方式中，所述初代培养基中还包括0.3-1.0g/L的核糖核酸酵母。添加核糖核酸酵母的有益效果主要为核糖核酸酵母能使藤蕹外植体茎杆黄化率显著降低，腋芽生长速度相对较快，植株生长势更为旺盛。
[0015]在一个优选的实施方式中，所述初代培养基中还包括0.5g/L的核糖核酸酵母。
[0016]在一个具体的实施方式中，所述继代培养基中还包括0.02g/L的特丁基对苯二酚、0.05g/L的硝酸银、0.05g/L的Vc和0.lg/L的柠檬酸中的一种。从效果上来看，抗氧化剂特丁基对苯二酚能够显著降低茎杆基部愈伤组织的褐化率，并且效果优于0.05g/L的硝酸银、0.05g/L的Vc和0.1的g/L柠檬酸，因此优选0.02g/L的特丁基对苯二酚。
[0017]在一个具体的实施方式中，所述继代培养基中还包括0.1-0.5g/L的L-羟基脯氨酸、0.3-0.7g/L L-丝氨酸和0.1-0.5g/L的L-盐酸半胱氨酸中的一种或多种。所述氨基酸的混合使用大大提高丛生芽繁殖系数，更有利于组培苗的继代培养。
[0018]在一个具体的实施方式中，所述继代培养基中还包括15%的藤蕹伤流液。15%的藤蕹伤流液对提高丛生芽的繁殖的效果与所述抗氧化剂和氨基酸的以最佳浓度的混合使用具有等同的效果。
[0019]在一个具体的实施方式中，所述继代培养基中MS培养基为改良的MS培养基，其中，所述改良的MS培养基具体为2475mg/L的硝酸铵、1900mg/L的硝酸钾、440mg/L的二水氯化钙、370mg/L的七水硫酸镁、225mg/L的磷酸二氢钾、70mg/L的氯化钾、0.83mg/L的碘化钾、6.2mg/L的硼酸、22.3mg/L的四水硫酸锰、8.6mg/L的七水硫酸锌、0.25mg/L的二水钥酸钠、0.025mg/L的五水硫酸铜、0.025mg/L的六水氯化钴、100mg/L的肌醇、0.5mg/L的烟酸、0.5mg/L的盐酸卩比卩多醇、0.lmg/L的盐酸硫胺素、2.0mg/L的甘氨酸、0.3mg/L的泛酸隹丐、139.0mg/L的七水硫酸亚铁和186.5mg/L的乙二胺四乙酸二钠。
[0020]在一个具体的实施方式中，在所述步骤B)中的培养的条件为:所述未萌发腋芽伸长至Icm之前的温度为30.0±0.50C ;所述腋芽伸长至Icm之后的温度为25.0±0.5°C，光照强度为20001x，光照时间为16小时/天；
[0021]和/或在所述步骤C)中的培养的条件均为:光照时的温度为28.0±0.5°C，黑暗时的温度为18.0±0.5°C，光照强度为30001x，光照时间为16小时/天；
[0022]和/或在所述步骤D)中的培养的条件均为:光照时的温度为28.0±0.5°C，黑暗时的温度为18.0±0.5°C，光照强度为30001x，光照时间为16小时/天；
[0023]和/或在所述步骤E)中，所述炼苗时温度为25.0±0.5°C，光照强度为20001x，光照时间为16小时/天，湿度控制在85%以上。
[0024]在一个具体的实施方式中，所述步骤B)中的培养时间在7-10天；和/或所述步骤
C)中的继代I次培养时间12-16天；和/或所述步骤D)中的培养时间8-12天；和/或所述步骤E)中的炼苗时间为10-14天。
[0025]在一个优选的实施方式中，所述步骤B)中的培养时间在7天；和/或所述步骤C)中的继代I次培养时间12天；和/或所述步骤D)中的培养时间8天；和/或所述步骤E)中的炼苗时间为10天。
[0026]在一个具体的实施方式中，所述碳源选自葡萄糖、果糖、麦芽糖、蔗糖和白糖中的一种或多种，优选白糖。
[0027]在一个具体的实施方式中，还包括藤蕹脱毒培养的步骤i)，所述步骤i)在所述步骤B)之后且在步骤C)之前，取初代培养后腋芽伸长至3cm以上的外植体的顶芽，或直接获取生长于室外的藤蕹主藤上顶芽，剥取长度为0.8-1.2mm茎尖后，将所述顶芽茎尖接种至启动培养基中进行脱毒培养，所述生长于室外的藤蕹主藤上顶芽需要消毒，消毒方法同所述步骤A)的预处理中的所述消毒方法；所述启动培养基为MS培养基+0.1-0.3mg/L的萘乙酸+0.05-0.20mg/L的赤霉素+30g/L的碳源+6g/L的琼脂粉+1.5g/L的活性炭；和/或所述步骤i)中的脱毒培养时间为14-18天，优选为14天。对于受到病原菌侵染的母株，通过茎尖脱毒获得的组培苗，相对于未经脱毒的母苗，其抗病性、抗逆性、适应性均大大增强，生长期更短，产量更高，农药、化肥的施用量减少，既降低了生产成本，又减轻了对环境造成的污染，生产出来的安全无公害蔬菜具有良好的经济效益和生态效益。此外，藤蕹脱毒I次后，可直接在实验室或室外进行营养快繁，无需再次进行脱毒；对于未受病毒侵染的母株，无需考虑脱毒步骤，直接进行快速繁殖，可以在较短的时间和较少的空间内，由I个个体繁殖出大量植株。
[0028]在一个具体的实施方式中，所述藤蕹选自长沙藤蕹。
[0029]与传统育苗方式相比，本发明的有益效果:
[0030](I)本发明提供的方法不受季节限制，每个月份均可出苗。如果I月份开始进行藤蕹组织培养，3月份即可出苗，3月底就有藤蕹可以上市。与传统的藤蕹埋地窖越冬保存母苗相比，本发明提供的方法可以使上市时间将近提早I个月。而且，对于优化的实施方案来说，整个培养过程所需要的时间比未优化的实施方案能够提早半个月的时间，这更有利于藤蕹提早上市。
[0031](2)本发明提供的方法短时间内能获得大量植株。从外植体接种到大田繁苗仅需55天，组培苗出瓶到移入大田仅需10天，诱导成活率高达97.59%。与传统扦插繁殖相比较，本发明提供的方法带I个腋芽藤条茎段通过组织培养技术可繁殖140株藤蕹组培植株，短时间内获得的植株数量大。
[0032](3)本发明提供的方法节约场地。整个培养过程在控温控光的光照培养室中进行，I个培养瓶可以培养6株组培苗，I层培养架(规格为长1250mmX宽500mmX高360mm)即可培养672株组培苗，与扦插繁殖相比较，占用场地面积小。
[0033](4)本发明提供的方法可以节约劳动成本。在藤蕹整个培养过程中无需整地、盖膜、浇灌肥水，无需配备专门管理的人员，与传统扦插繁殖相比较，要节约大量劳动力和成本。
【专利附图】
【附图说明】
[0034]图1炼苗的藤蕹组培苗。
【具体实施方式】
[0035]下面结合具体实施例对本发明做详细说明，但本发明的范围并不限于此。
[0036]所用的MS培养基为Murashige and Skoog,配方见表1,1/2MS培养基的配方见表
2。其中，FeSO4.7H20 可使用 FeSO4.7H20 与 Na2.EDTA.2H20 进行配制，形成 Fe.EDTA 螯合形式，其原因为二价铁只有在PH5.2左右时才能被组织所利用，而以螯合形式提供的铁直到培养基在培养过程中PH上升至7.6-8.0时仍可以被植物组织所利用。
[0037]表I MS培养基成分(单位:mg/L)
大量元素 I含量I微量元素I含量I有机物质I含量I铁盐[￥?
NH4NO31650 Κ?0.83~ 肌醇100~ FeSO4.7Η2027.8
KNO^?2 烟酸0Γδ~Na2.EDTA.2Η20 37.3
CaCl2.2Η20 440~ MnSO4.4Η20 22.3~ 盐酸吡哆醇 0.5MgSO4.7Η20~~ZnSO4.7Η20 8?6 盐酸硫胺素 07?KH2PO4170~ Na2MoO4.2Η20 0.25~ 甘氨酸 ?70
CuSO4.5Η20 0.025
CoCl2.6Η20 0.025
[0039]表2 1/2MS培养基成分(单位:mg/L)
大量元素 I含量I微量元素I含量I有机物质I含量I铁盐[Wl
【权利要求】
1.一种藤蕹组织培养的方法，其特征在于，包括如下步骤:
A)预处理:获得藤蕹藤条，流水下冲洗干净，将其剪成3-4cm的茎段，所述茎段中至少带有I个未萌发的腋芽，并对所述茎段表面消毒；
B)初代培养:接种于初代培养基中培养，所述初代培养基为MS培养基+2.0-3.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤+0.1-0.3mg/L的萘乙酸+30g/L的碳源+6g/L的琼脂粉，pH值范围为5.5-5.8 ；
C)继代培养:选择初代培养后苗高在4cm以上，且具有3-5个腋芽的外植体，剪成带有1-2个腋芽的茎段，接种于继代培养基中培养，待外植体产生的丛生芽长有3-5个腋芽时，分离所述丛生芽，转接至初代培养基中使腋芽伸长，苗高4cm以上后再转接至继代培养基中继续增殖；所述继代培养基为MS培养基+0.5-1.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤+0.3-0.7mg/L的赤霉素+30g/L的碳源+6g/L的琼脂粉，pH值范围为5.5-5.8 ；
D)生根培养:选择苗高4cm以上，具有3-5个腋芽的外植体，接种于生根培养基中培养，所述生根培养基为1/2MS培养基+0.3-0.6mg/L的萘乙酸+15g/L的碳源+6g/L的琼脂粉，PH值范围为5.5-5.8 ；
E)选择根据所述步骤D)的苗高4cm以上，具有3-5个腋芽的组培苗，已生根且根系发达的组培苗进行炼苗。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤A)中的消毒液为添加吐温20的5%次氯酸钠溶液或添加吐温20的0.1 %的升汞溶液，且每10mL消毒液中滴入50 μ L吐温20，消毒时间为5-8分钟。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述初代培养基中还包括0.3-1.0g/L的核糖核酸酵母；所述初代培养基中优选包括0.5g/L的核糖核酸酵母。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述继代培养基中还包括0.02g/L的特丁基对苯二酚、0.05g/L的硝酸银、0.05g/L的Vc和0.lg/L的柠檬酸中的一种，优选包括0.02g/L的特丁基对苯二酚。
5.根据权利要求1-4任意一项所述的方法，其特征在于，所述继代培养基中还包括0.1-0.5g/L的L-羟基脯氨酸、0.3-0.7g/L的L-丝氨酸和0.1-0.5的g/L的L-盐酸半胱氨酸中的一种或多种。
6.根据权利要求1-4任意一项所述的方法，其特征在于，所述继代培养基中还包括15%的藤蕹伤流液。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述继代培养基中MS培养基为改良的MS培养基，其中，所述改良的MS培养基具体为2475mg/L的硝酸铵、1900mg/L的硝酸钾、440mg/L的二水氯化钙、370mg/L的七水硫酸镁、225mg/L的磷酸二氢钾、70mg/L的氯化钾、0.83mg/L的碘化钾、6.2mg/L的硼酸、22.3mg/L的四水硫酸锰、8.6mg/L的七水硫酸锌、0.25mg/L的二水钥酸钠、0.025mg/L的五水硫酸铜、0.025mg/L的六水氯化钴、100mg/L的肌醇、0.5mg/L的烟酸、0.5mg/L的盐酸卩比B多醇、0.lmg/L的盐酸硫胺素、2.0mg/L的甘氨酸、0.3mg/L的泛酸钙、139.0mg/L的七水硫酸亚铁和186.5mg/L的乙二胺四乙酸二钠。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤B)中的培养的条件为:所述未萌发的腋芽伸长至Icm之前的温度为30.0±0.5°C ;所述腋芽伸长至Icm之后的温度为25.0±0.5°C，光照强度为20001x，光照时间为16小时/天；
和/或在所述步骤C)中的培养的条件均为:光照时温度为28.0±0.5°C，黑暗时温度为18.0±0.5°C，光照强度为30001x，光照时间为16小时/天；
和/或在所述步骤D)中的培养的条件均为:光照时温度为28.0±0.5°C，黑暗时温度为18.0±0.5°C，光照强度为30001x，光照时间为16小时/天；
和/或在所述步骤E)中，所述炼苗时温度为25.0±0.5°C，光照强度为20001x，光照时间为16小时/天，湿度控制在85%以上。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括藤蕹脱毒培养的步骤i)，所述步骤i)在所述步骤B)之后且在步骤C)之前，取初代培养后腋芽伸长至3cm以上的外植体的顶芽，或直接获取生长于室外的藤蕹主藤上顶芽，剥取长度为0.8-1.2_顶芽茎尖后，将所述顶芽茎尖接种至启动培养基中进行脱毒培养，所述生长于室外的藤蕹主藤上顶芽需要消毒，消毒方法同所述步骤A)的预处理中所述消毒方法；所述启动培养基为MS培养基+0.1-0.3mg/L的萘乙酸+0.05-0.20mg/L的赤霉素+30g/L的碳源+6g/L的琼脂粉+1.5g/L的活性炭。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述藤蕹选自长沙藤蕹。
【文档编号】A01H4/00GKSQ
【公开日】日
申请日期:日
优先权日:日
【发明者】杨博智, 袁祖华, 周书栋, 杨建国, 戴雄泽, 杨晓, 童辉, 杨剑
申请人:湖南省蔬菜研究所