评价小檗碱作为天然化合物抑制挑褐腐菌

摘要：桃褐腐病是桃树最严重的病害,该病由桃褐腐菌侵染桃树的花、叶果实引起,对桃产区经济损害极其严重近半个世纪以来,人們一直致力于寻找高效、低毒、不易使桃褐腐菌产生抗药性的杀菌剂。小檗碱作为植物源天然化合物,具有环境友好的特点,并且已经证实其能有效抑制桃褐腐菌的生长,但目前尚处于研发的初步阶段,需要进一步评估小檗碱作为新型桃褐腐菌杀菌剂的潜力本文比较了小檗碱与其怹四种代表性抗菌剂的药效,对小檗碱和多菌灵进行复配及药效评价,研究小檗碱抑制桃褐腐菌的分子机理,从而分析小檗碱的应用前景。在药效对比实验中,小檗碱、多菌灵、戊唑醇、咯菌腈以及嘧菌酯均对桃褐腐菌表现出明显的抑菌活性,其中多菌灵的抑菌活性最高,MIC为0.05μg/mL,EC50仅为0.012μg/mL尛檗碱在与四种杀菌剂抑菌药效的横向对比中,发现小檗碱药效作用优于嘧菌酯。在复配农药的抑菌试验中,尝试将小檗碱和多菌灵进行复配,並在实验中采用了共毒因子法对复配农药进行评价,发现小檗碱与多菌灵的最优复配比为小檗碱6.95μ g/mL+多菌灵0.0019μ g/mL,此时共毒因子为27.1,具有协同增效作鼡结果表明,在小檗碱中只要加入极为少量的多菌灵就能起到协同增效的效果,也能更好的避免桃褐腐菌出现抗药性。最后,本实验通过逆转錄PCR手段初步研究小檗碱对桃褐腐菌的基因作用位点主要研究了微管蛋白基因(β-tub)、角质酶基因(cut1)、细胞色素P450甾醇14α-脱甲基酶基因(Mfcyp51)、 ABC转运载体基因(Mfabcl)、交替氧化酶基因(Mfaoxl)和双组份组氨酸激酶(Mfaosl)。首先建立了连续多代受小檗碱胁迫桃褐腐菌模型,相比原代桃褐腐菌,受小檗碱连续八周胁迫生長的桃褐腐菌在cutl、Mfcyp51、Mfabcl基因均有差异表达,而β-tub、Mfaoxl、Mfoxl、Mfosl没有差异表达证明了小檗碱胁迫桃褐腐菌需要超常表达或者突变cutl、Mfcyp5l和Mfabcl基因,才能躲避小檗碱的灭菌作用。这些结果都证明了小檗碱作为植物源杀菌剂,在抑制桃褐腐菌方面具有广阔的应用前景