提取有关小白鼠的介绍体内的高浓度抗体的关联操作

胰岛B细胞移植是一种有效治疗糖尿病的方法.利用小鼠再生胰腺提取物(RPE) 可定向诱导人羊膜间充质千细胞(hAMSCs) 分化成胰岛 B 细胞.请回答下列问题:

(1)取人羊膜组织刮除血块、上皮细胞冲洗后剪碎,然后用______酶处理最终制成hAMSCs 悬液.将细胞悬液放人培养瓶中进行原代培养,当细胞贴壁生长到一定阶段时出现______现象,此时细胞停止分裂增殖这时需要将细胞进行相关处理,然后进行传代培养.

(2)取传至第 3 代的hAMSCs放入细胞培养板同时加入RPE 進行诱导分化培养.该代hAMSCs 能保持细正常的______.诱导分化培养15天后,提取细胞的______用胰岛素基因探针进行分子杂交,可初步检测 hAMSCs 是否分化成胰島 B

(3)用人的杂交瘤细胞来生产人源单克隆抗体难以成功因此单克隆抗体大都来自鼠源.但鼠源单抗在人体内使用时,会产生较强的免疫原性为解决这一问题,发明了嵌合抗体.大致过程如图所示:

嵌合抗体能降低鼠源抗体的免疫原性从图中可以推测,免疫原性的生主要与抗体的______(选填“v 区“、“c 区“)有关.嵌合抗体的生产属于______工程范畴.

(4)科学家们用细胞融合实验证明分化的细胞中存在“闲置不用“的结构基因.他们把大鼠肝肿瘤细胞和小鼠成纤维细胞融合成杂交瘤细胞,筛选出含有两套肝细胞染色体和一套成纤维细胞染色體的细胞.这些细胞既保持了合成大鼠肝细胞 3种特异蛋白的能力也合成了小鼠肝细胞这 3 种蛋白,但是在正常的小鼠成纤中从不合成这些.由此可见融合实验证明了小鼠成纤维细胞______

解:(1)取人羊膜组织刮除血块、上皮细胞,冲洗后剪碎然后用胰蛋白酶(或胶原蛋白酶)处理,最终制成hAMSCs悬液.将细胞悬液放人培养瓶中进行原代培养当细胞贴壁生长到一定阶段时,出现接触抑制现象此时细胞停止分裂增殖,这时需要将细胞进行相关处理然后进行传代培养.

(2)10代以内的细胞可以保持正常的二倍体核型,因此传至第 3 代的hAMSCs能保持细正瑺的(二倍体)核型.细胞分化的实质是基因的选择性表达因此要检测 hAMSCs 是否分化成胰岛 B 细胞,在诱导分化培养15天后可提取细胞的RNA(或mRNA),用胰岛素基因探针进行分子杂交.

(3)从图中可以推测免疫原性的生主要与抗体的C区有关.嵌合抗体的生产属于蛋白质工程范畴.

(4)把大鼠肝肿瘤细胞和小鼠成纤维细胞融合成杂交瘤细胞,这些细胞既保持了合成大鼠肝细胞3种特异蛋白的能力也合成了小鼠肝细胞這3种蛋白,但是在正常的小鼠成纤中从不合成这些.由此可见融合实验证明了小鼠成纤维细胞含有不表达的但肝细胞专一表达的基因,茬特定条件下这些“闲置基因”也可表达.

(4)含有不表达的但肝细胞专一表达的基因在特定条件下这些“闲置基因”也可表达

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