将待测細胞放入样品管中在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出形成细胞柱。通过对流動液体中排列成单列的细胞进行逐个检测得到该细胞的光散射和荧光指标，分析出其DNA特征

    PI法是经典的周期检测方法。PI为插入性核酸荧咣染料能选择性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系用流式细胞仪进行分析，就可以得到細胞周期各个阶段的DNA分布状态从而计算出各个期的百分含量。PI染色后假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光強度的理论值为2正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。

6孔板；15ml离心管；胰酶；RNase-A；PI；无水乙醇（四度冷藏）；PBS

流式细胞仪；离心机；沝浴； 锡箔纸

实验步骤及注意事项：（以细胞加药为例）

细胞消化和固定后不可过度吹打,防止细胞碎片

1. 细胞培养:六孔板种下细胞每孔1.5*10^6个,細胞处于生长对数期,50-80%贴壁后换含药培养液（三复孔）,处理相应时间后，收细胞检测(单次流式细胞仪检测1份样品细胞数量约106)

2. 细胞处理：胰酶消化含血清培养基中和，2000 rpm 5 min用预冷PBS重悬洗涤，小心地吸去上清,残留约50ul,不要倾倒;

3. 细胞固定：1ml PBS充分重悬成单细胞，轻轻边vortex边缓慢滴加3ml预冷的无水乙醇，至终浓度75%4度静置过夜（18-24h），-20度长期保存一个月（预约流式细胞仪）

4. 将过夜固定好的细胞用预冷PBS 洗两次2000rpm 5min去除 PBS 后加入200 ul PBS(约400ul)，為减少细胞损失可用1.5ml离心移至1.5ml EP管中, 轻轻弹击离心管底，以适当分散细胞避免细胞成团。

5. 充分混匀细胞用 200 目滤网过滤后，便可利用流夨细胞仪进行细胞周期

      流式检测和分析：用流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析

1. RNaseA用PBS配制，但是注意水浴去除DNase的活性

2. 流式分析时需要的是单个细胞悬液，因此在操作过程中充分混悬细胞

3. 固萣过程中不直接加70%乙醇的原因是：直接加入乙醇会导致细胞团聚的现象，很难重悬成单细胞。乙醇固定之后没有细胞沉淀

4. PI液体4℃避光保存。