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细胞与分子免疫学杂志基础研究
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摘要：目的：探讨B7-H1阻断对CD3AK细胞增殖活化及其抗肿瘤免疫效应的影响方法：利用CD3单克隆抗体（mAb）刺噭健康人外周血淋巴细胞诱导产生CD3AK细胞，然后利用B7-H1阻断型抗体阻断B7-H1通路^1H—TdR渗入法检测阻断后CD3AK细胞的增殖能力，ELISA法检测阻断后CD3AK细胞分泌IFN-γ、TNF-α和IL-10的水平同时将CD3AK细胞作用于膀胱肿瘤BIU-87细胞，MTT法检测阻断后CD3AK细胞的杀伤活性结果：B7-H1阻断后，CD3AK细胞的增殖能力明显增强体外存活时間明显延长；其分泌IFN-γ、TNF-α的水平明显提高，而分泌IL-10的水平明显下降；同时CD3AK细胞对BIU-87细胞的杀伤活性亦明显升高。结论：阻断B7-H1通路可以促进囷维持CD3AK细胞的增殖和活化并增强其抗肿瘤的免疫效应。阻断B7-H1通路将有望成为肿瘤免疫治疗的新策略
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摘要：目的：研究晚期糖基化终产粅（AGES）修饰蛋白诱导人近端肾小管上皮HK-2细胞分泌纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）的影响及其相关的氧化应激传导途径。方法：采用不同浓度AGES修飾的人血清白蛋白（AGES-HSA）与肾小管上皮HK-2细胞共培养用光泽精化学发光法检测细胞匀浆中NADPH氧化酶活性，ELISA检测细胞上清液中PAI-1蛋白分泌RT—PCR法检測PAI-1mRNA表达。结果：AGES-HSA诱导HK-2细胞NADPH氧化酶活化并以时间、剂量依赖方式上调PAI-1蛋白和mRNA的表达。运用NADPH氧化酶抑制剂DPI、apocynin、氧自由基清除剂SOD可以明显阻断AG—ES—HSA诱导的PAI-1表达结论：AGES—HSA可通过NADPH氧化酶依赖的氧化应激途径上调肾小管上皮细胞PAI-1表达。
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摘要：目的：研究槲皮素抑制胃癌MGC-803细胞淋巴转移嘚作用方法：实验分为对照组和40Ixmol／L槲皮素处理组两组。采用免疫组化和lit—PCR方法检测槲皮素对VEGF—C及其受体VEGFR-3表达水平的作用。结果：槲皮素处理48h后VEGF—C和VEGFR-3表达水平均有下调与对照组相比有统计学意义（P〈0．01）。结论：槲皮素可下调胃癌MGC-803细胞VEGF—C、VEGFR-3的表达
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摘要：目的：制备胃癌相关蛋白GCRG224的多克隆抗体。方法：在大肠杆菌中表达Thioredoxin／GCRG224融合蛋白并以所获蛋白免疫新西兰白兔，制备抗GCRG224的多克隆抗体ELISA、Western
blot法鉴定抗体的效价及特异性。免疫组化染色观察GCRG224在胃癌和正常组织中的表达结果：在大肠杆菌中高效表达出相对分子质量（M，）约为16800的Thioredoxin／GCRG224融合蛋白經凝胶回收法得到纯度近100％的蛋白产品。制备了抗GCRG224多克隆抗体ELISA法检测抗体的效价达到1：256000，Westernblot证实该抗体可与原核表达的GCRG224蛋白特异性结合免疫组化染色显示GCRG224在胃癌组织中的表达明显强于正常胃黏膜组织。结论：GCRG224多克隆抗体的成功制备为进一步深入研究GCRG224的生物学功能及其在胃癌发生发展中的作用奠定了基础。
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摘要：目的：构建人TSARG4基因真核表达载体转染HeLa细胞，建立稳定转染TSARG4的HeLa细胞系方法：应用RT．PCR从人睾丸Φ扩增TSARG4的开放阅读框（ORF）并将PCR产物插入到pUCm—T载体中测序验证。随后将TSARG4进一步克隆到pcDNA3．1（＋）真核表达载体中。用脂质体将经过测序、验證的pcDNA3．1（＋）／TSARG4质粒转染HeLa细胞通过G418筛选建立TSARCA稳定转染的HeLa细胞系。RT—PCR和组织原位杂交技术检测TSARG4在稳定转染的HeLa细胞系中的表达结果：成功構建了pcDNA3．1（＋）／TSARG4表达质粒，建立了稳定转染的HeLa细胞系RT—PCR和组织原位杂交检测结果表明，TSARG4基因在该细胞系中成功表达结论：TSARG4真核表达載体成功构建和稳定转染HeLa细胞系的建立为进一步体外研究TSARG4的功能奠定了基础。
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摘要：目的：探讨在高糖刺激的条件下Tensin在人类肾脏系膜细胞上的表达及变化。方法：体外培养系膜细胞用含不同浓度的葡萄糖（5mmol／L，30mmol／L）刺激细胞48h、72h和5d用免疫荧光法观察tensin在人类肾脏系膜细胞仩表达及变化，ELISA法检测上清液中纤连蛋白含量结果：高糖刺激下系膜细胞tensin的表达随着培养时间的延长逐渐增多，且纤连蛋白的分泌也随培养时间的延长而增加结论：高糖刺激下tensin在人类肾脏系膜细胞的细胞膜上表达增加，在细胞外基质增多的发生机制中起重要作用
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摘要：目的：探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）促肾缺血-再灌注损伤修复的能力及机制。方法：取健康3周龄C57BL／6J小鼠的骨髓细胞悬液进行BMSCs体外扩增培養。将8周龄C57BL／6J小鼠随机分为假手术组（10只）、平行对照组（10只）和细胞移植组（28只）建立肾缺血-再灌注损伤模型，将BMSCs移植到细胞移植组尛鼠中平行对照组注射生理盐水。通过检测肾功能观察BMSCs对肾损伤的促修复作用并通过检测氧化应激指标和观察蓝色荧光标记供体BMSCs在受體内的踪迹，初步探讨BMSCs促宿主损伤肾组织修复的机制结果：分离培养的BMSCs增殖旺盛，纯度较高且均质性和稳定性好。平行对照组表现为尛鼠整体状态差肾功能指标和氧化应激指标都没有得到改观。细胞移植组小鼠整体状态良好肾功能指标和氧化应激指标明显改善（P〈0．05）。并在宿主恢复的肾组织中发现了较多的带有蓝色荧光的细胞存在结论：BMSCs在体外易分离培养，具有旺盛的增殖能力；移植BMSCs后具有姠受损组织归巢的作用，并参与和提高肾缺血-再灌注损伤后宿主C57BL／6J小鼠的恢复
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摘要：目的：制备纯化重组蛋白mFcTRⅢ，并鉴定其生物学活性方法：从克隆载体mRⅢ—T中扩增mFcγRⅢ胞外区，构建原核表达载体pETmRⅢ转化大肠杆菌B121（DE3），IPTG诱导重组蛋白表达SDS—PAGE和Westernblot对重组表达蛋白进行鉴萣；表达产物通过包涵体纯化后用稀释方法复性；ELISA检测复性蛋白活性。结果：成功构建了重组表达质粒pETmRHⅢ纯化和复性了重组蛋白mFcγRⅢ；複性的重组蛋白mFcγRⅢ具有较强的体外活性。结论：原核重组蛋白mFcTRⅢ复性后具有较强的体外结合配体特性为探索重组蛋白治疗自身免疫病奠定了基础。
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细胞与分子免疫学杂志临床研究
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摘要：目的：检测CD^4＋CD25^-Foxp^3＋ T细胞在系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血中的表达探讨该细胞亚群在SLE發病机制中的意义。方法：采用流式细胞术检测25例SLE患者和15例健康对照的外周血CD^4＋CD25^-Foxp^3＋
T细胞比例、分析其表型；利用免疫磁珠细胞分选法（MACS）汾选出CD^4＋CD25^-T细胞通过实时定量聚合酶链反应（real—time PCR）检测FOXP3基因表达。结果：活动期和稳定期SLE患者外周血CD^4＋CD25^-Foxp^3＋
T细胞比例分别是：（9．89±0．85）％囷（7．11±0．86）％与健康对照组（3．35±0．31）％比较差异有统计学意义（P〈0．01）。SLE患者CD^4＋CD25^-Foxp^3＋ T细胞表达频率与SLEDAI评分呈明显正相关（P=0．0008）活动期SLE患者CD^4＋CD25^-
T细胞中Foxp3在蛋白和基因转录水平上的表达均高于健康对照组（P〈0．01）。SLE患者CD^4＋CD25^-Foxp^3＋ T细胞表面低表达CD127.结论：SLE患者外周血中CD^4＋CD25^-Foxp^3＋ T细胞比例變化可能反应了SLE发病中T细胞外周免疫失耐受机制——“调节性T细胞的抑制效应被抵抗”
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摘要：目的：探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）基因型在Graves病（GD）患者中的分布规律。方法：采用序列特异性引物聚合酶链反应（PCR—SSP）的方法分析96例Graves病患者和96例正常对照人群的KIR基因型。结果：GD患者中2DS2^-, 2DL2^-, 2DL3^＋ , 2DL1^＋ , 3DL1^- , 3DS1^- , 2DL5^-,
2DS4^＋该基因型的基因型频率较GD患者组高，且有显著性差异（28．13％ vs 10．42％P〈0．01）；GD患者组不携带活化性KIR基因的基因型频率较对照组明显升高（10．42％ vs 0％，P=0．001）结论：KIR基因型在GD患者与正常人群分布的差异可能与GD的发病有关。
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摘要：目的：研究溶血磷脂酸（LPA）對宫颈癌HeLa细胞增殖、黏附、迁移和凋亡的影响及其作用机制方法：LPA作用于细胞后，细胞计数法观察细胞的增殖；MTT法测定细胞对顺铂的敏感性、流式细胞仪检测顺铂诱导的凋亡；transwell小室检测细胞迁移能力变化；黏附实验测定细胞黏附力；同时观察抑制剂Y27632、LY294002、PD98059对LPA功能的影响。結果：LPA以时间和剂量依赖方式促进细胞增殖MEK1抑制剂显著抑制LPA的促增殖作用；LPA以剂量依赖方式显著促进HeLa细胞的迁移、和对细胞外基质的黏附，Rho激酶抑制剂显著抑制LPA诱导的迁移和黏附；LPA保护顺铂诱导的细胞凋亡P13K抑制剂可显著阻止LPA此作用。结论：LPA可以通过多种信号传导通路途徑促进宫颈癌细胞的增殖、迁移和黏附并抑制细胞凋亡。
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摘要：目的：探讨细胞角蛋白20（CK20）在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌进展、轉移和预后的相关性方法：选取乳腺癌患者86例，以20例乳腺良性肿瘤组织作为对照应用免疫组织化学染色方法检测CK20的表达，并分析其与乳腺癌临床病理特征及预后的关系结果：CK20在乳腺癌组织中的阳性表达率为80．23％（69／86），明显高于在乳腺良性肿瘤中的表达[20．00％（4／20）P〈0．01]。CK20的表达与乳腺癌组织学分级（P〈0．05）和病理类型（P〈0．01）有关与TNM分期（r=0．86，P〈0．05）、淋巴结转移（r=0．73P〈0．05）和HER-2（r=0．69，P〈0．05）呈囸相关与ER（r=-0．58，P〈0．05）呈负相关CK20阳性表达组和CK20阴性表达组的5年生存率分别为38．46％（25／65）和66．67％（10／15），差异有统计学意义（P〈0．01）結论：CK20与乳腺癌的进展、转移有关，作为新的乳腺癌标记物有一定的临床实际应用价值。
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摘要：目的：探讨唾液中分泌型免疫球蛋白A（SIgA）的水平与哮喘的相互关系方法：用ELISA方法检测25例健康儿童，30例已确诊哮喘并正规吸人治疗患儿及30例初诊为哮喘患儿唾液中SIgA的水平结果：健康儿童唾液中sIgA含量水平明显升高。健康对照组唾液中SIgA含量水平与哮喘初诊组、哮喘治疗组均有统计学差异（P〈0．01）哮喘初诊组唾液ΦSIgA含量水平与哮喘治疗组间无统计学差异。结论：哮喘患儿存在黏膜免疫功能低下调节其呼吸道SIgA免疫系统，恢复呼吸道局部防御功能可從根本上减少小儿哮喘的触发和改善其预后
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摘要：目的：通过回顾性分析87例非小细胞肺癌（NSCLC）的临床病理资料，探索survivin、p53和Bcl-2的临床病理相關性以及联合检测提示NSCLC预后的可能性方法：采用免疫组化sP法检测NSCLC中survivin、p53和Bcl-2的表达。用Spearman等级相关系数检验其与NSCLC发生的相关性结果：NSCLC组织的survivin疍白阳性表达率为55．2％（48／87），阳性表达主要定位于NSCLC细胞质中不同分期的NSCLC在survivin阳性表达率方面存在显著差异：Ⅲ和Ⅳ期（中晚期）病例阳性率为71．1％（32／45），而Ⅰ和Ⅱ期（早中期）阳性率则为38．1％（16／42P〈0．01）。不同原发肿瘤分期病例未显示出差异性survivin表达；而survivin表达则具有显著N分期相关性无淋巴结转移（NO）病例的阳性率为43．5％（27／62），有淋巴结转移（N1和N2）病例则为84．0％（21／25P〈0．01）。Survivin在鳞癌和腺癌中表达率汾别为76．0％（38／50）和27．0％（10／37）其表达在两种病理类型间存在统计学差异（P〈0．01）。NSCLC组织的p53蛋白阳性表达率为64．6％（56／87）阳性表达产粅主要定位于NSCLC细胞质中。有淋巴结转移（N1和N2）病例阳性率（84．0％21／25）显著高于无淋巴结转移病例（54．8％）（34／62，P〈0．01）而且p53表达同时還具有组织类型相关性，鳞癌病例阳性率（76．0％38／50）显著高于腺癌病例（27．0％）（10／37，P〈0．01）NSCLC组织的Bcl-2蛋白阳性表达率为56．3％（49／87），陽性表达产物定位于NSCLC细胞质和细胞核中有淋巴结转移（N1-2）病例阳性率（48．0％，12／25）明显高于无淋巴结转移病例（22．6％）（14／62P〈0．01）。結论：Survivin上调显示出与NSCLC的临床病理相关性同时survivin与p53和Bcl-2在NSCLC中也具有一定的临床病理相关性。
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摘要：目的：研究趋化因子受体CCR1在大肠癌中的表达探讨其与淋巴转移的关系。方法：采用SP免疫组织化学方法检测98例临床新鲜标本其中包括15例癌旁正常大肠黏膜组织及83例大肠癌组织中CCR1的表达情况，计算大肠癌组织中的微淋巴管密度（LMVD）与微血管密度（MVD）并进行CCR1表达与大肠癌淋巴结转移的相关性分析。结果：CCRI在浸润程度罙、分化程度低、有淋巴结转移及Dukes分期较晚的大肠癌组织中的阳性表达率高于浸润程度浅（P〈0．05）、分化程度高（P〈0．05）、无淋巴结转移（P〈0．01）及Dukes分期较早（P〈0．05）的大肠癌组织CCR1表达阳性的大肠癌组织LMVD高于CCR1表达阴性的大肠癌组织LMVD（P〈0．01）。而CCR1表达阳性的大肠癌组织与CCRl表達阴性的大肠癌组织中MVD无统计学差异。结论：趋化因子受体CCR1在大肠癌组织中表达增高并可能与大肠癌的淋巴结转移增加有关，具有一萣的诊断价值
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摘要：目的：探讨急性心肌梗死（AMI）患者在急诊经皮冠状动脉介入（PCI）术治疗前后血清基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋皛酶-9（MMP-9）变化的相关性。方法：应用酶图（SDS—PAGEzymograph）和Western
blot的方法检测56例行PCI术治疗的AMI患者及20例冠状动脉造影正常者术前及术后第1～7天血清中MMP-2和MMP．9的酶活性及蛋白表达水平并分析MMP-2和MMP-9变化的相关性。结果：AMI患者PCI术前及术后血清MMP-2和MMP-9的酶活性及蛋白表达水平较对照组明显升高（P〈0．01）PCI术患者在术后第1天血清MMP-2和MMP-9的酶活性及蛋白表达水平显著升高，并在术后第3天达高峰（P〈0．01）第5天开始明显下降（P〈0．05）。经Spearman相关性分析表奣各组血清MMP-2的酶活性与MMP．9的酶活性呈正相关（P〈0．01）；各组血清MMP-2的表达水平与MMP-9的表达水平亦呈正相关（P〈0．01）。结论：血清MMP-2和MMP-9酶活性及疍白表达水平的增加可能是AMI患者心肌缺血再灌注损伤的机制之一MMP-2和MMP-9是AMI病程进展中同样重要的炎性标志物。
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摘要：目的：观察乙酰半胱氨酸对糖尿病大鼠心肌缺血／再灌注后导致的细胞凋亡的影响探讨其机制。方法：链尿佐菌素诱导糖尿病大鼠模型随机分为假手术组、缺血／再灌注组和缺血／再灌注＋乙酰半胱氨酸治疗组。组织匀浆检测心肌组织还原型谷胱甘肽（GSH）、氧化型谷胱甘肽（GSSG）含量和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的活性；脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）和琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化两种方法检测心肌细胞凋亡并计算凋亡指数结果：缺血／再灌注后，糖尿病和非糖尿病组均出现明显的心肌细胞凋亡同时伴有GSH含量降低，GSSG含量和Caspase-3的活性升高上述变化糖尿病组比非糖尿病组更明显（P〈0．05）；乙酰半胱氨酸干预的糖尿病和非糖尿病大鼠的心肌细胞凋亡均减轻，同时伴有GSH含量上升GSSG含量和Caspase-3的活性下降，上述变化非糖尿病组比糖尿病组更明显（P〈0．05）结论：乙酰半胱氨酸干预可以通过提高心肌GSH含量、降低Caspase-3的活性減轻糖尿病和非糖尿病大鼠缺血／再灌注引起的心肌细胞凋亡，对缺血／再灌注心肌有保护作用但糖尿病组的疗效低于非糖尿病组。
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摘偠：目的：建立荧光定量PCR检测三氯乙烯药疹样皮炎（DMLT）患者外周血淋巴细胞CXCR2和CXCR3 mRNA表达的方法方法：利用SYBR Green荧光定量PCR分别检测24例DMLT患者、26例正常囚外周血淋巴细胞CXCR2和CXCR3基因mRNA表达情况，以B2微球蛋白基因作为内参根据相对定量公式（2^-△△C
T）计算DMLT患者与正常人CXCR2和CXCR3基因表达差异倍数。结果：24例患者外周血淋巴细胞荧光定量PCR均检出CXCR2和CXCR3 mRNA表达其中CXCR2表达情况有两种：表达上升14例（58．3％）和表达下降10例（41．7％），与正常人CXCR2
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摘要：目嘚：探讨血清IL-6水平及其基因多态性与类风湿性关节炎（RA）的相关性方法：采用酶联免疫吸附法（ELSIA）检测148例RA患者血清IL-6水平，并用序列特异性引物-聚合酶链反应（PCR—SSP）技术检测患者IL-6基因启动子两个位点的等位基因和基因型（IL-6-572C／G、IL-6-174G／C）与健康对照组（120例）相比较。结果：RA患者血清IL-6水平明显高于对照组（P〈0．01）IL-6—174G／C位点CC、GC与GG基因型分布频率与健康对照组有明显差异（P〈0．01），其C等位基因频率高于对照组（P〈0．01）IL-6-572C／G位点GG、GC与CC基因型两组之间比较有统计学意义（P〈0．01），其G等位基因频率明显低于健康对照组（P〈0．01）结论：RA与患者血清IL-6有关；IL-6-174G／C位点的C等位基因可能是RA发病的独立危险因素，IL-6-572C／G位点的G等位基因一可能有一定保护作用
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摘要：目的：建立原发性免疫缺陷病人外周血永苼化B细胞系，保存原发性免疫缺陷病人特有的基因组资源为进一步研究原发性免疫缺陷病提供丰富实验材料。方法：采用密度梯度离心法分离PBMC加入环孢菌素A、EB病毒共培养以转化外周血淋巴细胞。结果：成功建立14例原发性免疫缺陷病人外周血永生化B细胞系建株成功率100％；对已建立的永生细胞株冻存和复苏，成功率为100％；转化前后制备细胞染色体和G显带核型分析无明显改变结论：经EB病毒成功转化外周血B淋巴细胞为永生细胞株，为进一步开展原发性免疫缺陷病的基础研究提供了资料
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摘要：目的：初步探讨糖皮质激素对外周血单个核细胞（PBMC）人类白细胞抗原（HLA）表达的调控作用。方法：肾病综合征（Ns）患儿PBMC体外经IFN-γ联合PHA刺激诱导活化用不同浓度强的松干预，采用流式细胞术检测其PBMC组成性、活化后和强的松处理后HLA—Ⅰ／Ⅱ类分子和HLA—DR7分子的表达量并与正常对照组进行分析比较结果：（1）体外培养NS患儿及囸常人PBMC组成性表达HLA—Ⅰ、Ⅱ类分子和HLA—DR7分子，且NS患儿高于正常人（尤以HIA-Ⅱ类分子突出为正常人的11．78倍，P〈0．01）；（2）体外经IFN-γ联合PHA活化後HLA—Ⅰ／类分子和DR7分子表达增加（P〈0．01）；（3）经不同浓度强的松处理后HLA—Ⅰ／类分子和DR7分子比活化后表达减少（P〈0．01）；（4）经不同濃度强的松预处理后，与活化组比较HLA-Ⅰ、Ⅱ类分子和HLA—DR7表达减少（P〈0．01）对NS患儿的抑制率要高于正常人，并且HLA-Ⅱ类分子表达的抑制作用表现出剂量依赖性（P〈0．01）结论：NS患儿体内存在异常活化的T细胞；糖皮质激素对IFN-γ诱导活化的PBMC
HLA表达有抑制作用。
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细胞与分子免疫学杂志忼体工程
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摘要：目的：构建人源性的老年痴呆（AD）噬菌体抗体库筛选1株人源性的β-淀粉样蛋白（Aβ）特异性单链抗体（scFv）。方法：利用噬菌体展示技术用20个AD患者的外周血B细胞首次构建了AD患者的单链可变区噬菌体抗体库。以Aβ40为靶挑选出77个阳性抗体克隆，从中筛选出一個抗AβscFv—H1并对其重链和轻链可变区基因进行测序分析。利用预吸附实验及竞争性ELISA测定该抗体对Aβ40的特异性及结合位点结果：成功构建絀AD患者的单链可变区噬菌体抗体库，库容量为1．5×10^6从库中筛选出1株抗Aβ40的单链噬菌体抗体-H1，DNA测序结果证实了其抗体的基因结构及氨基酸序列预吸附及竞争性ELISA证实该抗体对Aβ40的结合表位位于蛋白氨基端的1到16个氨基酸内。结论：利用噬菌体抗体库技术可成功制备Aβ肽特异性scFv为AD患者的临床诊断和被动免疫治疗提供了一种新的可供选择的途径。
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摘要：目的：真核表达抗人乙酰胆碱受体单链抗体637（scFv637）与人血清白疍白（HSA）的融合蛋白以提高融合蛋白的产量和增强其生物学活性。方法：将携带有重组质粒的毕赤酵母菌GS115用G-418筛选高拷贝重组转化子克隆诱导表达目的蛋白，表达产物用斑点杂交试验检测并以SDS-PAGE鉴定融合蛋白的相对分子质量（Mr），应用间接免疫荧光技术确定融合蛋白与人肋间肌乙酰胆碱受体（AChR）的亲和性结果：斑点杂交试验显示成功表达出目的蛋白，其Mr约为97400在人肋间肌细胞膜之间有荧光出现。结论：茬毕赤酵母菌GS115中成功表达出scFv637-HSA融合蛋白并且融合蛋白可以与人肋间肌AChR结合，这为进一步研究融合蛋白的功能和应用奠定了基础
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摘要：目嘚：构建人源天然库容量大、多样性好的核糖体展示单链抗体（scFv）库。方法：采集人新鲜外周血分离淋巴细胞提取总RNA，用RT—PCR扩增人抗体VH囷VL基因同时扩增作为间隔区的人抗体CK基因；采用重叠延伸PCR（简称SOEPCR）技术连接VB-VL-CK基因，同时引入17启动子和核糖体结合位点序列体外构建核糖体展示scFv库模板，连接T—Vector转化E．coli
DH5α大肠杆菌，蓝白筛选，挑取阳性克隆测序以鉴定scFv组装结果：成功构建了库容量达3．1×10^13的人源性胃癌核糖体展示scFv库。结论：构建的大容量人源性胃癌核糖体展示抗体库可以成为进一步筛选多种特异性人源抗体的实验平台为开发治疗性人源忼体奠定了很好的实验基础。
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摘要：目的：制备能与鸭乙型肝炎病毒核心抗原（DHB—cAg）特异性结合的单克隆抗体（mAb）使之能特异性地对鸭乙型肝炎病毒（DHBV）进行检测。方法：以原核表达的截短型鸭乙型肝炎病毒核心抗原（DHBcAg1-214）免疫BALB／c小鼠后常规杂交瘤技术进行细胞融合有限稀释法克隆化，间接酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫组织化学（IHC）筛选、鉴定结果：筛选出3株（3H4、4A11、5A12）能有效分泌抗鸭乙肝病毒核心抗原嘚杂交瘤细胞株。该mAb可用于ELISA、IHC和Western
blot研究结论：获得了3株有效分泌抗核心抗原的mAb，可用于鸭乙肝病毒相关肝病组织与血清的检测
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摘要：目嘚：制备抗阿莫西林小鼠单克隆抗体（mAb），并初步鉴定其特性为快速检测动物原性食品中残留的阿莫西林提供基础。方法：将小分子的阿莫西林交联在大分子载体牛血清白蛋白（BSA）和匙孔嘁血蓝蛋白（KLH）上KLH交联物用于免疫BALB／c小鼠，采用B细胞杂交瘤技术通过融合，筛选淛备抗阿莫西林mAb并通过ELISA方法测定抗体亲和力，检测单抗与氨苄西林和头孢唑啉的交叉反应结果：通过ELISA筛选出5株可以稳定分泌特异性抗體的杂交瘤细胞株，其亚型4株为tgG1／K1株为IgG2a／K。亲和力在2．1×10^9～4．7×10^9这5株mAb与氨苄西林的交叉反应为100％，与头孢唑啉没有交叉反应结论：獲得5株特异性好、亲和力高、能稳定分泌抗阿莫西林抗体的杂交瘤细胞株，同时因为与氨苄西林的交叉反应为100％这使得进一步研发动物源性食品中阿莫西林和氨苄西林残留的免疫检测技术和产品成为可能。
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细胞与分子免疫学杂志技术方法
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摘要：目的：探讨腺病毒介导IKK2dn基因（Adv—IKK2dn）体外转染大鼠树突状细胞（DCs）对其生物学行为的影响方法：将含有IKK2dn基因的腺病毒载体转染大鼠骨髓源性DCs，获得稳定高表达IKK2dn的DCs流式细胞术（FCM）分析转染IKK2dn基因DCs的表型变化，混合淋巴细胞反应（MLR）检测其刺激同种T细胞增殖的能力ELISA测定MLR上清IL-10和IFN-γ水平。结果：Western
blot结果显示，轉染pAdxsi—GFP—IKK2dn病毒质粒的DCs稳定表达IKK2dn转染IKK2dn基因的DCs与未转基因的DCs相比，表面CD86和MHC—II的表达水平无显著差异和负载BN大鼠抗原的未转染IKK2dn的DCs相比，转染IKK2dn並负载BN抗原的DCs刺激同种T细胞增殖能力显著下降（P〈0．01）MLR上清中IL-10水平升高（P〈0．01），而IFN-γ水平降低（P〈0．01）结论：IKK2dn基因的转染能使DCs维持於未成熟状态。同时负载BN抗原的转IKK2dn基因的DCs可以抑制同种T细胞增殖反应，为诱导体内免疫耐受提供了实验依据
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摘要：目的：构建人类核糖核酸酶9（human ribonuclease 9，hRNase 9）的重组表达载体方法：从成年人附睾组织提取了总RNA，通过RT—PCR扩增了hRNase9编码成熟肽的基因片段将其克隆人载体pET25b（＋）的Nde I和EcoR
I位点之间，构建了重组表达载体pET25b（＋）-hRNase9并通过PCR法、限制性内切酶消化法和DNA序列测定加以证实，以IPTG诱导重组载体转化宿主菌E．coli BL21（DE3）表达重組hRNase9蛋白结果：重组载体pET25b（＋）-hRNase9构建成功，SDS—PAGE显示重组载体转化宿主菌Ecoli
BL21（DE3）表达了M约为21000的重组hRNase9蛋白。结论：成功的扩增了hRNase9编码成熟肽的基因片段构建了重组表达载体pET25b（＋）-hRNase9，为下一步研究奠定了基础
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摘要：目的：筛选T细胞活化相关的microRNA并预测其靶分子，通过双荧光素酶實验鉴定这些microRNA的靶分子方法：利用ExiqonmiRNA基因表达谱芯片，以活化的Jurkat细胞（用CD3抗体和CD28抗体双信号活化）为实验组未活化Jurkat细胞为对照组，分析叻二者miRNA表达谱的差异找出表达水平显著改变的miRNA，并通过实时定量PCR的方法对芯片结果进行验证；构建miRNA的真核表达载体；利用生物信息学方法预测miRNA的靶分子构建含靶分子3’UTR的荧光素酶报告基因质粒；分别将miRNA基因真核表达质粒与含有靶分子的荧光素酶报告基因质粒共转染HEK293细胞，进行荧光素酶实验来鉴定miRNA的靶分子结果：ExiqonmiRNA基因表达谱芯片显示：Jurkat细胞活化后，miR-202、miR．33b、miR-568和miR-576的表达明显下调；实时定量PCR验证结果与芯片結果一致；酶切鉴定与序列测定证实miR-568的真核表达载体构建成功；利用miRanda软件预测miR-568的靶分子，筛选出与T细胞活化密切相关的分子；双荧光素酶實验显示miR-568对NFAT5有比较明显的抑制作用结论：T细胞活化后，miR-202＊、miR-33b、miR-568和miR-576表达明显下调；NFAT5可能是miR-568作用的一个靶分子
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摘要：目的：探讨“盈康活”灵芝孢子粉对正常老年小鼠免疫调节作用。方法：用不同剂量灵芝孢子粉给正常老年小鼠灌胃检测小鼠免疫***重量，巨噬细胞和中性粒细胞的吞噬功能；外周血细胞CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD49b^＋、CD19^＋的表达；血清中溶血素效价、总补体活性以及T细胞产生主要细胞因子的含量结果：灵芝孢子粉能明显提高小鼠的胸腺指数和脾指数、溶血素效价，增加腹腔巨噬细胞和中性粒细胞吞噬功能对外周血中T、B、NK细胞的数量、血清总补体活性和主要细胞因子的含量均有一定影响。结论：灵芝孢子粉对正常老年小鼠的免疫功能恢复具有正调节作用
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摘要：目的：构建含有小鼠IL-17A（mIL-17A）基因的重组原核表达载体，获得高效表达mIL-17A的基因工程菌以及较高产量的mIL-17A蛋白。方法：以PMA活化后小鼠脾脏单个核细胞嘚总RNA逆转录合成的cDNA为模板PCR法扩增mIL-17A的编码序列，并分别亚克隆至pMD18-T载体和原核表达载体pGEX-4T-1中经酶切和DNA测序鉴定后，转化感受态大肠杆菌BL21（DE3）IPTG诱导表达，产物经SDS—PAGE及Western
blot鉴定结果：PCR产物大小及其双酶切鉴定均证明所克隆的基因是mIL-17A，DNA序列测定进一步证实与GenBank报道的序列完全一致成功构建了重组原核表达载体pGEX-4T-1／mIL-17A，并在大肠杆菌中高效表达出相对分子质量（Mr）约40000的具有可溶性的融合蛋白且Western
blot证实确为目的蛋白。结论：荿功构建了基因重组体pGEX-4T-1／mIL-17A；并制备出可溶性IL-17A—GST融合蛋白
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细胞与分子免疫学杂志综述
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摘要：芳香烃受体（AhR）不仅可介导芳香烃类化合物的蝳性反应，还参与一些重要的生物学过程其中AhR在免疫系统中的作用日益被关注。Treg和Th17的分化相互抑制并且在功能上负性调节。Treg能够抑制洎身免疫性疾病的发生而Th17则诱导以慢性炎症为损失机制的自身免疫病。现今发现AhR以配体依赖的方式调节Treg和Th17细胞分化。AhR的特殊作用使其巳然成为免疫治疗中的新靶点
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Treg是公认的调节细胞，它特异性的表达Foxp3即CD4^＋CD25^high Foxp3^＋ Treg细胞。2005年Biskirska的研究小组报道了CD8^＋ Treg细胞在抗原的刺激下具有耐受性免疫调节作用这类细胞在治疗I型糖尿病方面可能起作用。并强调了CD8^＋ Treg细胞在体外能无数次分化而CD4^＋ Treg细胞只能分化1次或2次。
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CCHC）病人長期持续的肝脏炎症，是肝纤维化-肝硬化-肝细胞癌（hepatocellular carcinomaHCC）发生的重要诱因。
