蝮蛇抗栓酶与肝素对膀胱肿瘤细胞与 血小板粘附影响的实验研究-医学教育网-青年人
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蝮蛇抗栓酶与肝素对膀胱肿瘤细胞与&血小板粘附影响的实验研究
来源：青年人()&更新时间： 19:51:47 &【字体： 】
730050 兰州军区总医院泌尿外科，全军泌尿外科中心
　　【摘要】　目的　提高防治膀胱肿瘤复发和转移的效果。　方法　通过MTT法观察蝮蛇抗栓酶与肝素在体外抑制膀胱肿瘤BIU-87细胞系对血小板粘附的影响。　结果　蝮蛇抗栓酶组抑制膀胱肿瘤BIU-87细胞粘附血小板作用优于混合组(蝮蛇抗栓酶+肝素),混合组抑制作用优于肝素组。蝮蛇抗栓酶组、混合组和肝素组抑制作用明显优于空白对照组(t检验P&0.01,P&0.05)。　结论　蝮蛇抗栓酶与肝素临床综合用药对于防止膀胱癌细胞转移与复发具有重要意义。　　【关键词】　膀胱肿瘤　　癌　　血小板粘附
The effect of ahylysantinfaretase on the adhesionof bladder cancer cells to platelets
ZHAO Jianhua,ZHANG Shaozeng,WANG Yanning,et al
Department of Urology, General Hosptial of Lanzhou Command,PLA,Lanzhou 730050
　　【Abstract】　Objective　To elucidate the mechanism of the retarding effect of ahylysantinfaretase on the bladder cancer cells.　Methods　The human bladder transitional cell line BIU-87 was used in the study.The adhesion of the cancer cells to platelets was observed and studied by means of MTT colorimetry.　Results　The retarding effect on the adhesion of cancer cells to platelets was the strongest with ahylysantinfaretase even stronger than the combined use of ahylysantinfaretase and heparin while the combined use of the two being better than heparin alone.(P＜0.01,P＜0.05).　Conclusions　Ahylysantinfaretase might be effective for the prevention of recurrence and metastasis of bladder carcinoma.　　【Key words】　Bladder neoplasms　　Carcinoma　　Platelet adhesiveness
　　自1968年Gasic等发现血小板与肿瘤转移的相关性之后,人们开展了大量的体内与体外研究,证明血小板有助于某些肿瘤转移的发生［1］。Karpatkin等［2］于1988年首先应用体外肿瘤细胞─血小板粘附实验,赵继懋等［3］应用噻唑蓝(MTT)比色分析法观察了血小板功能状态对粘附的影响。我们在此基础上研究蝮蛇抗栓酶与肝素对膀胱移行细胞癌BIU-87粘附血小板的影响。报告如下。
材料与方法
　　一、主要材料
　　1.细胞株:BIU-87膀胱移行细胞癌细胞系由北京医科大学泌尿外科研究所惠赠。在CO2恒温培养箱,RPMI 1640含10%胎牛血清细胞培养液培养,贴壁对数生长,0.5%胰酶和0.04% EDTA消化液分散细胞,磷酸缓冲液(PBS)制成细胞悬液待用。　　2.血小板:由本院输血科提供健康献血员新鲜血小板浓缩液,EDTA/PBS液洗脱,使用血小板稀释液调成5×108/ml,室温待用。　　3.蝮蛇抗栓酶与肝素:均稀释为500U/ml,50U/ml,5U/ml,备用。
　　二、主要步骤
　　1.血小板铺板按文献方法［1，2］,培养板置于4°C冰箱待用。　　2.肿瘤细胞与血小板粘附试验按文献方法［1-3］,将BIU-87细胞用含钙PBS稀释成5×109/ml。将细胞悬液分为蝮蛇抗栓酶组、肝素组、蝮蛇抗栓酶与肝素混合组,另设一空白对照组。前3组再各分为3组，分别含蝮蛇抗栓酶500U/ml、50U/ml、5U/ml及肝素500U/ml、50U/ml、5U/ml及各含蝮蛇抗栓酶250U/ml与肝素250U/ml,蝮蛇抗栓酶25U/ml、肝素25U/ml,蝮蛇抗栓酶2.5U/ml和肝素2.5U/ml。将各组细胞悬液5ml放入含有血小板的培养板中，CO2恒温培养箱37°C,1小时培养。　　3.MTT法比值:洗去培养板中未粘附的肿瘤细胞,加MTT(1mg/ml)50μl/孔,于37°C中孵育1.5小时,取出培养板加二甲基亚砜(DMSO)200μl/孔,置于37°C,30分钟,取出培养板振荡后静置2分钟，用紫外分光光度计测各孔吸光度(A)值(波长492nm)。
　　一、蝮蛇抗栓酶与肝素对BIU-87细胞粘附的影响结果见表1
表1　蝮蛇抗栓酶与肝素对BIU-87细胞粘附的影响(吸光度A值)
药物浓度(U/ml)
0.10±0.07
0.13±0.06
0.18±0.06
0.14±0.07
0.17±0.08
0.23±0.07
0.12±0.08
0.15±0.08
0.22±0.07
0.36±0.14
0.36±0.14
0.36±0.14
　　5U/ml肝素组与混合组(蝮蛇抗栓酶和肝素各2.5U/ml)经t检验P&0.05，差异无显著性,余相同浓度各组之间,同组不同浓度之间差异均有显著性(P&0.01，P&0.05)。
　　二、用药浓度与吸光度A值的关系
　　蝮蛇抗栓酶组抗血小板与BIU-87细胞粘附强于肝素组与混合组,经t检验3组之间差异均有显著性(P&0.05,P&0.01)。混合组抗粘附能力强于肝素组(P&0.05)。3组亦显示随着用药浓度降低，A值逐渐增高,即药物抗粘附能力逐渐减低。3组相对于空白对照组差异均有显著性(P&0.01)。
　　肿瘤转移为恶性肿瘤致死的关键因素,亦是一个复杂的多环节过程，现已证实此过程细胞粘附分子起重要作用。最近发现粘附分子受体(P-selectin,E-selectin,L-selectin)能介导血小板和内皮细胞与中性粒细胞、单核细胞及肿瘤细胞之间相互作用,它们在炎症、血栓形成以及肿瘤转移等过程中起着重要作用。其中肿瘤细胞恶性生长并从原发灶中脱离为肿瘤转移的关键,而肿瘤细胞与内皮细胞、细胞外基质粘附为癌血行转移不可缺少的环节,肿瘤细胞在血循环中与血小板等结合可使癌细胞免受吞噬细胞等的清除［4-6］。Stone等［7］研究发现,肝素、岩藻糖、硫酸粘多糖能抑制P-selectin介导的血小板与肺癌和神经母细胞瘤细胞株结合。而蝮蛇抗酸酶其药理机制显示能明显降低血液粘度,减少血小板数量,抑制其粘附和聚集功能［8］。本试验结果发现,3试验组随着药物浓度降低,吸光度值增高，即抑制血小板与BIU-87细胞粘附能力逐渐下降,提示蝮蛇抗栓酶和肝素能够抑制膀胱肿瘤患者癌细胞的复发和远处转移,这对于癌症患者术前、术后综合用药防止癌细胞转移与复发及提高癌症患者生存率方面具有重要意义。一些研究结果表明,在施行经尿道膀胱肿瘤电切时,可有大量存活的癌细胞脱落到膀胱内液体中,这些癌细胞粘附到损伤的尿路上皮是导致肿瘤复发原因之一［9，10］。人们是否能在电切时加入蝮蛇抗栓酶与肝素液体冲洗，以此来减低其复发与转移,尚有待于进一步研究。
《参考文献》
[1]　Pearlstein E,Ambrogio C,Karpatkin S.Effect of antiplatelet antibody on the development of pulmonary　　metastase following infection of CT26 colon adenocarcinoma, Lewis lung carcinoma and B16 amelanotic　　melanoma tumor cells into mice.Cancer Res,1984,44∶.[2]　Karpatkin S,Pearlstein E,Ambrogio C,et al.Role of adhesive proteins in platele tumor interaction in vitro　　and metastasis formation in vivo.J Clin Invest,1988,81∶.[3]　赵继懋,顾方六,蔡碧涓.高转移和低转移前列腺癌株细胞与血小板体外粘附. 中华泌尿外科　　杂志,1995,16∶541-544.[4]　Bevilaqua MP. Selectins.J Clin Invest,∶379.[5]　Maekay CR, Imhof BA.Cell adhesion in immune system.Immunol Today,1993,68∶4-7.[6]　Erbe DV . P-and E-selectin use common sites for carbohydrate ligand recognition and cell adhesion.　　J Cell Biol,∶.[7]　Stone JP,Wagner DD. P-selectin mediates adhesion of platelets to neuroblastoma and lung cancer　　cells. J Clin Invest,1993,92∶804-809.[8]　陈新谦,金有豫主编. 新编药物学.第14版.北京:人民卫生出版社，.[9]　See WA,Pohlf DP,Crist SA.In vitro particulate adherence to fibronectin correlation with in vivo　　particulate adherence to sites of bladder injury. J Urol,6-1421.[10]　Pode D,Alon Y,Horowitz AT,et al. The mechanism of human bladder tumor implantation in vitro　　model. J Urol,∶482-487.
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83岁男性患者，血小板很低，现在有血尿
状态：就诊前
建议血液科先就诊纠正血小板。
状态：就诊前
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疾病名称：潜在恶性膀胱肿瘤&&
希望得到的帮助：现在是否需要服中药
病情描述：潜在恶性膀胱肿瘤，己电切病灶，想服中药治
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疾病名称：膀胱肿瘤/膀胱癌&&
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病情描述：病人是我妹妹未婚夫，2015年8月第一次出现无痛尿血，当时立马进医院治疗，最终膀胱肿瘤病理诊断结果为：“膀胱肿瘤”示低度恶性潜能乳头状尿路上皮肿瘤。灰白碎组织，其直径约1.2cm。目前他已开...
疾病名称：低度恶性膀胱肿瘤&&
希望得到的帮助：我想知道在哪里抓中药能好一点
病情描述：术后一直进行灌注，现在我怕再次复发，想抓中药巩固治疗，请问在哪里可以抓中药
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希望得到的帮助：复发几率高吗
病情描述：低度恶性膀胱肿瘤，现在做了几次b
超，一切显示正常，有多发性肾结石
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希望得到的帮助：请医生给我一些治疗上的建议,刚刚在医院检查的血常规和尿常规
病情描述：我爸是扬州宝应的，号在省人民医院做的根治性膀胱全切术，3月29号换的j管，目前有点发热39.5度
疾病名称：刚查出恶性膀胱肿瘤，请问最佳治疗方法&&
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病情描述：因后腰疼做了尿道镜取样活检，现肾功能不全
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希望得到的帮助：低度恶性复发率高吗，
病情描述：去年11月2 号做的电切手术现在一直灌注，比柔比星我怕复发，想给他抓中药调理，没做过膀胱镜做了几次b
超显示都好着呢
疾病名称：恶性膀胱肿瘤怎么办？&&
希望得到的帮助：这样的治疗方式会影响病情吗？
病情描述：前段时间刚做激光手术，目前身体还行。术后肿瘤检查为恶性，院方建议三月复查再定解决方案！
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希望得到的帮助：请医生给我一些治疗上的建议,请问吴医生，像我爸爸这种情况，除了定期复查，还需注意些...
病情描述：半年血尿，以为膀胱结石，后查出是恶性膀胱肿瘤
疾病名称：膀胱肿瘤27X22无血尿&&
病情描述（发病时间、主要症状、就诊医院等）：
患者男，82岁，以前身体状况良好。有糖尿病
此次体检查出病情：膀胱右后壁处见27x22mm均匀等回声团块。CDFI有动脉血流信号。
曾经治疗情况和...
疾病名称：膀胱肿瘤&&
病情描述（主要症状、发病时间）：尿不尽。经检查做B超，膀胱肿瘤已经较大，榆林医院的医生说再过一段时间肿瘤会长的更大一些将会堵塞尿管。
曾经治疗情况和效果：榆林的医院说年龄太大手术的...
疾病名称：膀胱肿瘤&&
病情描述（发病时间、主要症状、就诊医院等）：
病人年龄84岁，主要是血尿，恶心，吃不下饭
曾经治疗情况和效果：
两年前做过开创大手术，切除部分膀胱，今年初做过电切，最近刚又做了肾切除...
疾病名称：膀胱肿瘤，疑是膀胱癌！&&
病情描述（主要症状、发病时间）：男，55岁，全程尿血20天左右，有血块，无任何病痛不适。
曾经治疗情况和效果：我父亲2月14日B超检查后疑是膀胱癌，医生叫住院进一步检查，一直打止血针和消...
疾病名称：膀胱肿瘤&&
病情描述（发病时间、主要症状、就诊医院等）：
经尿道电切术切出膀胱右侧后壁约1.0*2.0的水草样肿瘤，病理结果为低度恶性潜能乳头状尿路上皮肿瘤。
曾经治疗情况和效果：
手术前后，尿频尿急...
疾病名称：膀胱肿瘤&&
病情描述（主要症状、发病时间）：
肉眼血尿，07年7月25日至今。症状为：不痛、不频、不急。偶有血块出现。
曾经治疗情况和效果：
07年7月发现肉眼血尿就诊服用消炎药及止血药后肉...
疾病名称：膀胱肿瘤&&
病情描述（发病时间、主要症状、就诊医院等）：
患者，男，76岁，以前身体良好，现在病情：血尿，身体浮肿，全身无力。
曾经治疗情况和效果：
用中药治疗，有一定的作用，但不能彻底治好
疾病名称：膀胱肿瘤，血尿&&
病情描述（发病时间、主要症状、就诊医院等）：
原来有前列腺炎，时好时坏，只有尿频，尿痛症状轻，2012年春节前后尿痛明显，近一个月肉眼见血尿，在乡镇医院做了一次彩超，证实膀胱肿瘤
疾病名称：膀胱肿瘤&&
病情描述（发病时间、主要症状、就诊医院等）：
就诊医院：PLA251医院
2010年10月出现尿频 日就诊ct得出检查印象：
1 膀胱左侧壁占位性病变，性质考虑膀胱癌并左侧输尿管扩张，左...
疾病名称：膀胱肿瘤，血尿&&
病情描述（发病时间、主要症状、就诊医院等）：
原来有前列腺炎，时好时坏，只有尿频，尿痛症状轻，2012年春节前后尿痛明显，近一个月肉眼见血尿，在乡镇医院做了一次彩超，证实膀胱肿瘤
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擅长各类膀胱肿瘤的综合性诊疗，具有丰富的临床经验。尤其擅长早期膀胱肿瘤的诊断及腔内治疗，及肌层浸润性...
陈海戈，男，主任医师，教授。现任上海交通大学医学院附属仁济医院泌尿科膀胱肿瘤专业组负责人，兼任中华医...
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