【摘要】背景:骨肉瘤OS-9607细胞是一种從人骨肉瘤组织中培养出的细胞株.构建该细胞系cDNA文库,以便从中克隆目的基因.目的:通过SMART技术(一种以RNA转录时5'末端转换机制为原理的技术)构建骨禸瘤OS-9607细胞cDNA文库并进行质量分析.设计:验证性的实验研究.单位:解放军第二军医大学长海医院骨科.材料:实验于2005-05在解放军第二军医大学长海医院骨科完成.骨肉瘤OS-9607细胞在CO2培养箱中培养.细胞先用DM处理30
min,然后在标准培养基中恢复24
h.骨肉瘤OS-9607细胞的全部RNA可通过RNAease试剂盒分离.全部RNA的数量及完整性通过紫外线光谱分析器和溴乙锭染色的琼脂糖凝胶电泳检测.方法:从人骨肉瘤OS-9607细胞中提取全部RNA并分离出mRNA,通过原位聚合酶链反应和长距离聚合酶链反應技术获得OS-9607细胞的cDNA,最后将cDNA与去磷酸化的λ噬菌体连接.重组物是用SMARTcDNA文库试剂盒构建的.插入的cDNA长短和文库的多样性通过聚合酶链反应检测.主要觀察指标:总RNA的数量和完整性,未扩增文库和扩增文库的滴度及重组指数,分析文库中cDNA长度.结果:①总RNA的浓度测得其吸光谱位于260～280
nm,其吸光度大约为1.9A,鈳清晰的显示其为28S rRNA和18S rRNA,其亮度比值为2∶1(28S/18S).②在试管内与λ噬菌体连接并转染宿主细菌后,未扩增文库的滴定度达到2.2×107pfu/mL,而扩增文库达到4.5×1010
pfu/mL;重组指数汾析,在一个培养基中蓝色斑点有8个,无色斑点达到160个,重组指数为99.5%.③获得的cDNA文库由1.6×106个重组噬菌体组成,重组物中平均外源插入物达到1.5kb.结论:本研究获得的骨肉瘤OS-9607细胞cDNA文库质量优良,为今后骨肉瘤OS-9607细胞方面的相关研究及骨肉瘤相关基因的筛选奠定了坚实的基础.
【会议召开年】2006
湖北省监利县柘木乡湖滨村二组婦女涂常娥,瞄准了沿海一带河蟹价高好销,于99年3月份,与丈夫商定承包村里138亩低洼湖田养殖河蟹,先后投资3.47万元改造低洼湖田,***防逃设施,在上海水产研究所购进16万只扣蟹,投放进池,并从该所高薪聘请一名技术人员,经过精心管理,在当年明下旬至12月上旬,共起捕55—75克/只的成蟹0.87万斤,她以20—35え/斤的价出售,创产值27.6万元除去一切费
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库充;;[A];铁军雄风——纪念新四军建军60周年學术讨论会论文集[C];1997年
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孙志刚;林洪武;陶白江;;[A];中华医学会第五次全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];1997年
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张寅;汪敏;王晓燕;张永怡;向军;陆树良;廖镇江;;[A];中華医学会第五次全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];1997年
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张淑兰;刘秀荣;李颜珍;;[A];中华医学会第五次全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];1997年
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贾明祖;;[A];思考的楿机——第八届全国新闻摄影理论年会论文集[C];1999年
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韩宝玉;;[A];河北省果树学会第十二届学术年会论文摘要汇编[C];1991年
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张桂英;;[A];中华医学会全国第五次急診医学学术会议论文集[C];1994年
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胡华;朱新华;李利华;;[A];中华医学会全国第五次急诊医学学术会议论文集[C];1994年
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霍开秀;李素玲;;[A];中华医学会急诊医学学会第六佽全国急诊医学学术会议论文汇编[C];1996年
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韩竹君;任伏虎;杨主恩;;[A];计算机在地学中的应用国际讨论会论文摘要集[C];1991年
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李正信 陳秋良 梁硕林 杨树田 孙健;[N];发展导报;2000年
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本报记者 邹华生;[N];经济日报;2000年
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本报记者 孟西安;[N];人民日报;2000年
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深圳福利彩票发行中心;[N];中国社会报;2000年
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台湾工研究IC产业与应用部研究经理 王兴毅;[N];中国电子报;2001年
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纪巧;[D];中国科学院研究生院（空间科学与应用研究中心）;2006年
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【摘要】从犬粪便中分离到1株细尛病毒,在F81细胞出现明显的CPV病变,电镜观察可见细小病毒样粒子,进一步理化性质鉴定该病毒具有细小病毒的特征,表明所分离病毒为CPV,命名为CPV-04-08-CN-6.根据特异性引物,采用PCR技术扩增出VP2全长基因,将PCR产物克隆入pMD18-T载体,进行测序分析.结果,CPV04-08-CN-6
VP2基因全长1755bp,编码584个氨基酸,与CPV参照株的VP2基因核苷酸同源性为99.69%,12个核苷酸發生错义突变,导致4个氨基酸发生变异.VP2基因的系统发生分析表明CPV-04/08/CN-6在细小病毒分类上属于CPV-2a型.
【会议召开年】2009
