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哪位大侠做过原代细胞提取，用percoll分离的？小弟不得技术要领啊！急求帮助啊
最近在提取雏鸭的原代肝细胞，用的体内灌流法，先用肝素钠冲血，再用胶原酶IV消化，然后取下肝脏，剪碎，加培养基，500rpm离心，3min。离两次后，再用percoll分离。查的方法是：1、percoll原液1.131的，然后0.1MPBS 1:9稀释成分离液I，2、再与0.01M PBS以7:3配比，4000rpm先离心，得分离液II 3、缓慢加入细胞悬液，4000rpm分离3min。不知为啥，我做的总是不分层，总是集中在培养基和percoll之间，显微镜下就是图上这种，有细胞，但好多杂质。
请问大神，这些杂质是什么东西啊？细胞碎片吗？
还有我的PBS是自己配的，也是一些通用的配方，感觉没什么问题。
有做过percoll分离细胞的大神，告知一下percoll分离细胞的要点啊。我查的是分离液II配好后要先离心，再加细胞离心，这样合理吗？我也试过直接离心细胞，还是不行呢。
感激不尽感激不尽！！
无percoll-2.jpg
我是在室温离心的呢。请问percoll的工作液你是怎么配的，用的百分之多少的浓度？
那请问，离心之后是怎么分层的呢，细胞在哪一层啊。分出来的细胞没有杂质吧
我是取最底层的细胞，因为目标细胞大，要去除的细胞小。你要根据自己的情况去摸一下条件，percoll的百分比越高越纯，但是也要把握好度。
您好，想请教一下，我现在想用percoll分离细胞核，但是总是有其余的杂质。我想问一下，这时候是应该调转速还是percoll浓度？怎么调整呢？就是说这些参数的变化会怎样影响结果呢？是转速越大，分离的越纯还是反之？wideQQ号是，请不吝赐教！:rol::rol::rol:
我只是用来分细胞，没有分过核之类的，不过核质分离抽RNA还是做过的，不知道你那么做是用来干什么。另外按我分细胞的经验提高percoll浓度可以得到更纯的细胞（我是要沉淀的）。转数高可以使沉淀的细胞多一些。
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