[发明专利]一种制备CIK细胞的转动灌流装置无效
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【说明书】：
技术领域本发明涉及一种制备CIK细胞的自动灌流装置，属于生物技术与组织工程领域。背景技术CIK细胞，即细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine-Induced Killer，CIK)是一种新型的免疫活性细胞，CIK增殖能力强，细胞毒作用强，具有一定的免疫特性。由于该细胞同时表达CD3和CD56两种膜蛋白分子，故又称为NK细胞(自然杀伤细胞)样T淋巴细胞，兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性，和NK细胞的非MHC限制性杀瘤优点。该细胞对肿瘤细胞的识别能力很强，如同“细胞导弹”，能精确“点射”肿瘤细胞，但不会伤及“无辜”的正常细胞。尤其对手术后或放化疗后患者效果显著，能消除残留微小的转移病灶，防止癌细胞扩散和复发，提高机体免疫力，因此，CIK细胞被认为是新一代的肿瘤过继细胞免疫治疗的首选方案。随着肿瘤对人类生存健康的威胁日益严重，应对肿瘤的治疗模式也发生着日新月异的变化，各种肿瘤治疗的新药物、新技术、新方法层出不穷，其中各种肿瘤的免疫细胞治疗非常活跃，成为肿瘤生物治疗中重要的发展方向。1991年，斯坦福大学的Schmidt-Wolf等首次报道了该细胞。具体方法是将患者外周血单核细胞(PBMNC)进行分离后，在体外经γ干扰素、CD3单抗、白细胞介素1和白细胞介素2等细胞因子刺激后获得的一群异质细胞，具有增殖速度快、杀瘤活性高、非MHC限制、对正常骨髓造血影响轻微等优点。目前CIK细胞的制备过程基本相同，主要参照美国斯坦福大学骨髓移植中心建立的CIK细胞培养方法。本发明借鉴已有研究经验，建立一套优良的CIK细胞制备体系，更好服务于肿瘤细胞治疗的健康发展。发明内容本发明的目的是提供一种制备CIK细胞的自动灌流装置。本发明提供的一种制备CIK细胞的自动灌流装置包括灌流瓶、废液瓶和转动灌流反应器；所述转动灌流反应器的一端设有进液口，另一端设有出液口；所述进液口通过输入管路与所述灌流瓶相连通，所述出液口通过输出管路与所述废液瓶相连通；所述转动灌流反应器包括封闭的腔体和设于所述腔体内的细胞培养板，所述细胞培养板的底部为半透膜；所述细胞培养板的入口与所述进液口相连通，所述细胞培养板的出口与所述出液口相连通；所述输入管路和所述输出管路上均设有至少一个蠕动泵。上述的自动灌流装置中，所述半透膜能阻止待培养细胞穿过且能使细胞培养液通过，从而培养液能在所述装置中流动。上述的自动灌流装置中，所述灌流瓶和所述废液瓶的瓶盖上均设有气体滤头，所述气体滤头可以使所述罐流瓶和所述废液瓶内的压强与外界相同，并且可以隔绝外界空气中的细菌污染。上述的自动灌流装置中，所述进液口与所述输入管路通过管道夹相连接；所述出液口与所述输出管路通过管道夹相连接，从而可以加固连接。上述的自动灌流装置中，所述进液口与出液口有滤膜，可以阻挡细胞流出上述的自动灌流装置中，所述输入管路和所述输出管路上均设有一个蠕动泵，可以控制培养基液体在所述装置中的流速以适应细胞的营养需求。本发明提供的用于制备CIK细胞的自动灌流装置，可以降低制备过程中的生物安全风险，缩减操作步骤，减少污染机率，提高诱导效率。附图说明图1为本发明制备CIK细胞的自动灌流装置的结构示意图。图中各标记如下：1灌流瓶、2，3气体滤头、4输入管路、5输出管路、6转动转动灌流反应器、7进液口、8出液口、9，10蠕动泵、11废液瓶。具体实施方式下述结合附图对本发明做进一步说明，但本发明并不局限于以下实施例。本发明提供的制备CIK细胞的自动灌流装置包括灌流瓶1、废液瓶11和转动灌流反应器6；转动灌流反应器6的一端设右进液口7，另一端设有出液口8，转动灌流反应器6的进液口7通过输入管路4与灌流瓶1相连通，该连通处设有管道夹(图中未示出)，用于加固该连接；转动灌流反应器6的出液口8通过输出管路5与废液瓶11相连通，该连通处设有管道夹(图中未示出)，用于加固该连接；灌流瓶1的瓶盖上设有气体滤头1，废液瓶11的瓶盖上设有气体滤头3，从而可以使罐流瓶1和废液瓶11内的压强与外界相同，并且可以隔绝外界空气中的细菌污染；转动灌流反应器6包括一个封闭的腔体和设于该腔体内的细胞培养板(图中未示出)；该细胞培养板的底部为能阻止待培养细胞穿过且能使细胞培养液通过的半透膜；该细胞培养板的入口与转动灌流反应器6的进液口7相连通，该细胞培养板的出口与转动灌流反应器6的出液口8相连通；输入管路4上设有一个蠕动泵9，输出管路5上设有一个蠕动泵10，用于控制培养基液体在该装置中的流速以适应细胞的营养需求。上述的制备CIK细胞的装置中，输入管路4和输出管路5上的蠕动泵的个数可以根据实际需要进行调节；输入管路4与进液口7之间和输出管路5与出液口8之间均还可通过其它方式进行加固连接。使用上述装置时，先将诱导细胞接种到转动灌流反应器6内，加入培养基与特定诱导剂后，放入37℃培养箱内培养，48小时后开启蠕动泵9和10，并控制液体的流速为0.45ml/h；将培养液置于灌流瓶1中，通过蠕动泵9的运动将培养液在从输入管路4内输送到转动灌流反应器6内，流经反应器6，由输出管路5输送到废液瓶11中收集。细胞培养的第2天，并更换含有特定细胞因子的培养基(10ng/mL IL-4，1000U/mL的GM-CSF)；在培养基液体流速的控制过程中，液体的流速由输入管路4和输出管路5上的蠕动泵9和10控制，可随时根据细胞培养的需求调整培养基液体的流速；此灌流系统运行大约18-20天时，取细胞培养板进行观察与鉴定；此灌流系统一方面可以使新鲜培养液不断泵入，另一方面含有代谢废产物(乳酸、氨等)的废液不断排出，通过调节灌注速率，可以使营养物质和代谢废产物与细胞之间的质量传递，降低有害代谢废物浓度积累。
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