HPLC-MS-MS测定犬血浆中间尼索地平含量
： 目的：利用HPLC-MS-MS测定Beagle犬血浆中间尼索地平的含量，并计算药动学参数。方法利用Symmetry C18柱，20℃下，以乙腈-水（70∶30，v／v）为流动相，流速为0A．8ml／min，检测波长237nm。采用负离子多离子反应监测，用于定量分析的离子反应为m／z387．0→m／z122．0。血浆样品采用乙腈沉淀蛋白，进样质谱分析。结果方法...
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蛋白分析研究员HPLC、MS（上海张江）J10443
1、应用LC-MS进行蛋白质分子量的测定、二硫键测定、肽图测定、糖基化等工作；
2、对实验进行规划和总结，并完成相应的实验SOP；
3、面对各类蛋白样品，能够灵活应对并进行质谱测定，最后出具报告；
4、对有创新性的方法，及时撰写专利并申请专利；
5、对实验仪器进行日常维护并做好相关记录；
6、完成上级交办的其他工作。
警示：以招聘为名收取培训费用、提供培训贷款，或在录用过程中需支付体检、服装、押金等费用的，都属违法行为。一经发现，请
，并向当地公安机关报案。
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蛋白质糖基化是人体中最重要的一种蛋白质翻译后修饰方式,人体中超过50%的蛋白质是糖基化的。研究发现,寡糖在蛋白质结构构造、生物活性中起着至关重要的作用,人类许多疾病的发生和发展都与蛋白上N-糖链的结构和表达量的改变有关。因此,发展和建立分析N-糖链的方法,对生物和病理学研究具有积极现实意义。目前的研究方法主要是化学衍生法,其缺点是需要引入额外的化学试剂、操作步骤繁琐以及有副反应发生。化学酶标记法由于没有化学衍生法的特点,为研究糖蛋白中的N-糖链,提供了新的思路。首先,在本实验室前人工作的基础上,以Boc-Asn-GlcNAc为基础结构单元物质合成了同位素标记糖基受体d0/d8-PDPZ-Boc-Asn-GlcNAc,优化了受体合成方法：以DMT-MM作为反应缩合剂,探索温度、时间、反应物比例对受体产率的影响,合成受体反应产率达到95-98%。随后,我们以标准糖肽SGP为反应底物,对比Endo-M酶、(?)Endo-M-N175Q
近年,因N-连接糖链对细胞癌症的发生和转移、以及造血功能有密切关系,因而,其结构与生物功能之间关系研究倍受人们的关注。为了这些研究能够顺利进行,不仅需要研制开发相关糖类分析仪器,而且更急需开发糖链相关试剂和新的简便、高灵敏、高选择性的N-连接糖链分析方法。从冷冻的毛霉菌中提取出来的内-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶M (Endo-M酶)具有切断N-连接糖链五糖核心最内侧的两个N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc-GlcNAc)之间的糖苷键,将其中一个GlcNAc留在多肽链上,并把释放出来的糖链转移到另外一个含有GlcNAc残基的受体上的特性。根据Endo-M的这些特性,设计合成了既含有GlcNAc又含有电活性基团的受体,优化了各受体的合成以及纯化方法,初步探讨了在糖链转移酶Endo-M作用下各种受体与N-连接糖链的转移结合过程,由于所合成的受体易离子化或已带电荷,所以可以提高糖链衍生物在质谱检测器上的灵敏度。我们还进行了实际样品卵清蛋白的...
研究背景：禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)可以致使许多禽类发生急性传染病,一旦感染人类,往往会引起严重的呼吸道感染甚至导致宿主死亡。流感病毒表面的血凝素(hemagglutinin, HA)与其感染宿主细胞表面末端为唾液酸(SA)α2-3半乳糖(Gal)或SAa2-6Gal的糖链受体相结合,这一生物学过程标志着流感病毒侵染宿主机体的开始。HA是流感病毒识别以及结合宿主细胞受体,介导病毒和宿主细胞膜融合进而侵入宿主细胞的关键分子,也是流感病毒中和抗体以及疫苗研制的重要靶标。HA既是糖蛋白,又是一种糖结合蛋白,其糖基化不仅能够影响流感病毒与宿主受体之间的结合活性,还能改变病毒的毒力,也能参与流感病毒的逐步演化。HA糖链在流感病毒的整个生命周期中都发挥着极其重要的作用,因此准确掌握流感病毒感染宿主时的HA糖链结构及结构变化带来的影响,有助于进一步理解HA糖链在流感病毒感染中的重要生物学功能。然而,目前...
近年来,人们研究发现N-连接糖链与细胞癌症的发生和转移以及造血功能损伤有密切关联,因此对于N-连接糖链的结构与生物功能方面的研究日趋引起学者们的关注。但是,由于糖分子本身不含有π-π共轭结构,因而不能对其进行紫外或者荧光检测；同时由于已经开发出来的寡糖衍生化试剂总是存在衍生反应难控制或者质谱检测灵敏度低等问题,不能满足当前糖生物学分析的需要。因此,开发具有质谱响应灵敏性高的新型衍生化试剂及探索其应用于糖蛋白中N-糖链的检测有着重要意义。本论文重点研究了五种含有Boc-Asn-GlcNAc单元的新型受体对含有N-糖链的糖类物质进行分析,合成的受体具有紫外吸收,水溶性好,带有正电荷易于离子化的特点,能够有效的提高其糖链转移率,并具有较高的质谱响应；并对受体与N-糖链的反应条件和质谱检测条件进行了优化,对检测方法进行了考察。本论文主要做了以下研究：1.合成了四种用于检测N-连接糖链的受体,优化了各受体的合成条件以及纯化方法,并对目标化...
糖基化是一种在许多生命活动中都占据重要地位的化学反应过程,例如细胞的黏附、宿主-病原体的相互作用、蛋白质合成的控制以及许多细胞因子在生物体内生物活性的保留。研究证明,人类的许多病症如癌症、代谢性疾病、神经退行性疾病等,都与蛋白质表面糖链的结构与表达量息息相关。因此,对人体内糖链表达量的监控对于疾病的控制以及发生发展情况的掌握都具有重大意义。利用Endo-M酶的转糖基特性,结合基于质谱检测的稳定同位素标记方法,能够在不对标记效果和样品纯化造成不良影响的前提下,完成对N-糖链的相对定量过程。本文第一章对糖链的种类以及生物功能做了简要的介绍,并简单总结了糖链的提取分离和分析方法。第二章是受体的合成。我们在本实验室己发表文献所描述的合成方法的基础上,改进了受体do/d8-PEPZ-Boc-Asn-GlcNAc最后一步的合成方法,利用DMT-MM配合甲醇体系代替TPP-DPDS作为反应催化剂,使反应产率由原先的40%左右提高到80%以上。...
糖蛋白质是细胞表面膜、细胞间基质、血浆、粘液等的重要构成成分。因为这种糖链具有复杂的构造,所以,人们曾化过好多时间研究过它的直接、间接地关系细胞表面的种种识别现象。近年,对糖链机能的研究,随着细胞生物学、分子生物学的长足发展,已取得一些新的进展。本文介绍一下其现状。 摘蛋白质箱桩概况 高等动物的搪蛋白质中,能检测的单糖种类虽并不多(表1),但它的构造极其多样。与肤和多核普酸不同,连接着塘与糖的结合是多种多样的,有:1,2、1‘3、1‘4、1,6,且存在a、日和两种 衰1粉蛋白质中发理的单.群类名名称(略号》 {}}半乳糖‘Ga‘, 】1己搪!——— 二,{1}甘露楷(M匕n) ‘循}中性糖}(狭义)}——一一-一一-一— 』】1葡萄搪(G,c) (广义)}}一兀二丁万二一一片一~一不兀二二二万下一一~一一-一--一一一----一一 }—‘型些哩扁一!--一型哩哩竺一.-------------一···-一…}二己糖胺川一(...... (本文共5页)