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【求助】免疫荧光3标，红色，绿色和***如何进行叠加？&[精华]
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丁香园荣誉版主
这个帖子发布于6年零42天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
前一阵子做免疫3标，发现分别用的Cy5，Cy3和488作为荧光二抗显色，利用共聚焦拍照。然而，在选择cy5颜色的时候选成了***，cy3是红色，488是绿色。现在进行叠加的时候发现，Cy3和488的红色和绿色叠加已经是***了。cy5也是***。请问（1）有无办法对其中颜色进行更改（共聚焦上的源文件已经没有了，现在只有3张不同颜色的原图片，分别是CY5,CY3,488），或者其他的解决办法？（2）在ipp中如何进行叠加处理这样的3种三色，求具体步骤。我对蓝色，红色和绿色叠加已经很熟悉了。（3）大家在三标颜色的选择上建议该如何选择，以及优缺点点如何？谢谢
不知道邀请谁？试试他们
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wanliheng 编辑于
丁香园荣誉版主
skyskytotop cy5的***和cy3-488叠加的***分得比较开的话，我觉得可以这样：1.用photoshop 将cy5 的***涂成黑色，然后提取绿色和红色；2.同理操作将cy3-488黄涂成黑色，提取红色或者绿色，得到cy5的标记并将其转换成蓝色，3.最后进行叠加cy5的颜色在普通荧光下用肉眼是看不见的，当时共聚焦拍照后，加上了***的伪彩。仍然不是很明白该如何操作。您的意思是：（1）从Cy5的图片上得到红色和绿色；（2）从cy3和488合成的***上得到红色或者绿色，然后选其一，作为cy5的标记，并将其转换成为蓝色。（3）然后用（1）中的红色和绿色，同（2）中的蓝色进行叠加吗？-------------------------------------------------------------------------顺便问一个别的问题，红色和蓝色叠加以后是紫色的吗？
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wanliheng 编辑于
丁香园荣誉版主
hbchendl 楼主杯具了。如果不能区分红绿迭加的***与cy5的***，一张已经合成的照片就没用了。拍摄照片的时候不能只留一张合成的照片，至少应该留一张三种颜色各自的单色照片嘛。是我在一楼表述的不清楚，我不是只剩下一张已经合成的图片。我现在只有3张不同颜色的原图片，分别是CY5,CY3,488先前之所以说是只剩下一张图片是指这3张图片的附带信息都没有了。（拍共聚焦的时候照片有附带信息，但是必须存成共聚焦特有的格式，我没有共聚焦软件，只能存成jpeg，也就没有图片附带信息了。也就无法再应用共聚焦软件把CY3***的伪彩改成别的颜色了。）
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丁香园荣誉版主
感谢大家，每次发帖都有收获，技术上的，理论上的，思路上的……再一次告诉自己，一定要发帖，发了，就有可能希望知道是否有***，即便是不可行，也算是知道了。而不发帖，则永远也不可能知道，真的会“死不瞑目”的。
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丁香园荣誉版主
warmshine 请教楼主，您这是做多重染色吗？是的。版内精华帖中有好几个关于双标的帖子，可以看看。
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关于丁香园[天津网友]
2p咋调出来 ？
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