液相色谱根据目前市场情况主要分进口和国产两大类，；液相色谱仪结构主要由贮液器、高压输液泵、进样器、；1．贮液器：使用四元泵时（Aglient1200；1）流动相的纯度要求：有机溶剂必须是色谱纯，水必；流动相由高压泵输送和控制流量；1）使用前先进行排气purge；2）进样阀“Load”装样3）针先排汽泡；5）搬injected计时约10s，否则会倒流6；1）柱
液相色谱根据目前市场情况主要分进口和国产两大类，进口主要有美国产Waters（实验室存有Waters1525价格：35.6W）、安捷伦（实验室存有Aglient1200价格34.5W）、塞尔泰、戴安、日本岛津等系列；国产有大连依利特、大连江申、上海上分、上海伍丰、浙江温岭、北京温分等系列。 液相色谱仪结构主要由贮液器、高压输液泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成。 1．贮液器：使用四元泵时（Aglient1200），A、B、C、D四相中，若所用流动相中有含盐流动相，则A、D（进液口位于混合器下方）放置含盐流动相，B、C（进液口位于混合器上方）放置不含盐流动相；A、B、C、D四个储液器中其中一个为棕色瓶，用于存放水相流动相。在最后通常还有一个废液瓶。使用二元泵时（Waters1525），B相位于下方，通常放置盐溶液，A相位于上方，放置有机溶剂，可使用普通玻璃溶剂瓶贮存流动相。 附流动相使用注意事项： 1） 流动相的纯度要求：有机溶剂必须是色谱纯，水必须是超纯水且现从纯水机中取出不能过夜，缓冲溶液需现取超纯水配置，并经过0.45um滤膜（注意水相膜与油相膜不能混用）过滤除去其中的颗粒杂质和其它物质。任何流动相使用前都要经超声脱气，脱气后恢复到室温才使用。流动相使用不当引起的问题：流动相不纯会增加检测器噪声从而影响检测结果，长期积累会堵塞柱子；脱气不彻底有气泡会导致压力不稳，重现性差。 2） 流动相与固定相不能相互作用，否则造成柱效降低甚至损坏色谱柱。
3） 样品必须溶于流动相，否则会堵塞柱子。 4） 使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。 2．高压输液泵 流动相由高压泵输送和控制流量。泵由入口单向阀、出口单向阀、柱塞杆、密封圈等组成，是液相色谱仪的重要组成部分，是导致HPLC的高压、高速、高效特点的主要部件。 1）使用前先进行排气purge。Waters1525：先用针筒从上下两个泵口的排液阀分别各抽取约5 mL流动相，再打开参比阀（向右搬），点击purge图标，冲洗泵5 min（一般是默认5 min，之后仪器自己停泵），待停泵后，压力和流速都降至0后，才能关上参比阀（向左搬紧）。Aglient1200：逆时针松开参比阀，通过软件设置流速，从0上升至5mL/min，保持至少10min。 2） 若使用缓冲液，工作结束后需用超纯水清洗泵中残留的缓冲液。 3） 不让水或腐蚀性溶剂滞留泵中。
3．进样器：通常采用高压六通阀进样装置。
手动进样： 1） 进样图标出现 2） 进样阀“Load”装样 3） 针先排汽泡。 4） 进样 5） 搬injected 计时约10s，否则会倒流 6） 图标消失，拔针 7） 洗针（用溶剂洗） 4．色谱柱使用注意事项： 1） 柱子使用pH范围。C18反相柱一般适用的样品pH范围在2~8，故一定要精确调节好缓冲液的pH值和样品的pH值，并注意缓冲液的浓度不得超过0.02mol/L。 2） 柱子使用压力范围。正常状况下流速会逐步上升，柱压也随之逐步上升直至维持较稳定的范围，最高压力不超过4000Psi，注意结合每根柱子的使用说明，每天都要记录柱压。 3） 柱子使用流速范围。根据不同色谱柱设定相应的流速。
4） 柱子方向不能接反（否则会冲坏固定相）。 5） 使用缓冲液时，做完样品后应立即用超纯水冲洗管路及柱子1小时，然后用甲醇冲洗40分钟以上，以确保整个管路及柱子保存于有机溶剂中。 6） 长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相（如甲醇等），因为纯水易长霉。 5．柱温箱:控制温度，Waters1525一般设置柱温30~40℃，高于室温5℃，但必须打开示差检测器；Aglient1200可设低于室温10℃，最高可设定80℃。 6．检测器： UV检测器是HPLC中应用最广泛的检测器，当检测波长范围包括可见光时，又称为紫外-可见检测器。它灵敏度高，噪音低，线性范围宽，对流速和温度均不敏感，但是梯度洗脱时，还会产生漂移。紫外检测器一般针对有紫外吸收的样品的检测，其波长设置在样品的最大吸收波长处。
开机操作 附1：Waters-1525液相色谱仪操作详细规程 1、 使用人提前一周于精密仪器室进行预约 2、 登记仪器使用记录，擦拭桌面灰尘，检查废液瓶（有残留的话，及时先倒至卫生间）。 3、 打开柱温箱检查是否为所要使用的柱子（换柱子要注意流动方向），然后依次打开柱温箱、1525泵，2487紫外检测器和2414示差检测器，等待8 min，以便进行内部校正和诊断测试，检测器需要预热20 min。注意纯水机的蒸馏水每天更新一次。 4、 准备好自己所需的流动相，并用超声波清洗器脱气30 min。 5、 换上已脱气流动相，启动电脑，连接Breeze软件，左下角蓝色进度条完成即表示联机成功。先用针筒从上下两个泵口的排液阀分别各抽取约5 mL流动相，再打开参比阀（向右搬），点击purge图标，冲洗泵5 min（一般是默认5 min，之后仪器自己停泵），待停泵后，压力和流速都降至0后，才能关上参比阀（向左搬紧）。 6、 点击Manage Breeze，选择或新建一个Project/User 7、 若方法之前在相应的Project/User已保存，则可直接调用出来平衡。 8、 新建色谱方法：点击View Method，点击Pump图标，输入柱子最高限压，选择泵的模式（恒流或者梯度洗脱）、设定流速，流动相比例等；点击UV Det图标，在Channel 1中输入检测波长（若检测双波长则在Channel 2中输入另一波长值）；点击RI Det图标，在Temprtature中的External Heater 1中输入所需要的柱温箱温度，并打勾。 9、 平衡时，注意进样阀应处于Inject状态，点击平衡图标，选择色谱方法，系统平衡约30~60 min，平衡时需注意柱压力，如有异常需及时停泵，查找原因。（柚皮苷和柚皮素的检测（280nm）平衡至少需要20min以上，待两个紫外数值差值至少有5个零方可进样） 10、 平衡完成后，将进样阀搬回Load状态，点击Inject图标，更改样品名称、色谱方法和跑样时间，回车，放入进样针，等出现提示进样的对话框后再进样，进样量应是定量环体积的4倍（定量环20μL，进样量80μL），每次进样时宜保持相同的打针速度，切记不能将气泡打入，进样完成后，迅速将进样阀搬至inject状态，对话框消失后，再拔针，进样针立刻用溶剂清洗至少5次（样品溶剂如果是水相，用纯水清洗，有机相则用甲醇清洗），进样前如样品量够得话，建议再用样品润洗进样针。 11、 样品检测结束后，按停泵图标停泵，在紫外检测器面板上按shift+1关闭紫外检测器的氘灯（延长灯的寿命），然后开始洗柱子，C18反相柱用超纯水：甲醇（95：5已脱气）冲洗40 min（流速从0.5 mL/min慢慢加至1.0mL/min，增加流速过程需注意压力变化，不能超过限压，Symmetry型号的最好不能超过3000 PSI）。在此过程需另外超声一 2
瓶色谱纯的甲醇。下一步清洗将超纯水换成甲醇（已脱气），然后用甲醇：甲醇（50：50）冲洗40 min（流速调节同第一步的清洗过程）。 12、 柱子洗好后，停泵，待压力降至0后，打开参比阀，先用超纯水再用甲醇清洗进样口、进样针、泵孔，切记不能将空气打入进样口（至少5个注射器体积）。 13、 先关闭Breeze软件和电脑，再关柱温箱、泵、检测器，不必关闭UPS（断电保护器）。 14、 关机完成后，将仪器盖好防尘罩，整理实验台面，倒废液（两个都要倒干净，倒卫生间），关空调，关好门窗，并对仪器使用情况和仪器状态如实进行登记。 注意事项： 1. 如遇停电，UPS能维持半小时，应立刻停止测样，停泵，再换超纯水：甲醇（95：5已脱气）洗柱子30 min。 2. 正常状况下流速会逐步上升，柱压也随之逐步上升直至维持较稳定的范围，最高压力不超过4000Psi，注意结合每根柱子的使用说明，每天都要记录柱压。 3. 更换柱子时应先让柱前的管路通过流动相5min左右，然后再接上柱子，注意柱子的方向，并时刻观察压力。 4. C18反相柱一般适用的样品pH范围在2~8，故一定要精确调节好缓冲液的pH值和样品的pH值，并注意缓冲液的浓度不得超过0.02mol/L。 5. 柱温箱一般设置在30~40℃，高于室温5℃，使用柱温箱一定要打开示差检测器。 6. 使用示差检测器，每更换一个条件就必须先purge示差检测器参比池10 h，流动相要混合在一个瓶子脱气。 7. 从反相柱换至正相柱的步骤：甲醇
异丙醇（0.2 mL/min冲洗10 h）
正己烷（1.0 mL/min冲洗4 h）。 8. 不能对色谱方法，通道，数据等做删除处理。 9. 防止流动相流完，过滤头一定要浸没在流动相中。 10. 实验结束后确定整个仪器、色谱柱都保存在有机相中。 11. 缓冲液或超纯水必须每天更换新的，使用缓冲液要先用超纯水：甲醇（95：5已脱气）过渡20 min。缓冲液要过0.45μm的滤膜。 12. 一般情况下，Breeze软件操作界面出现3个选项按NO，2个选项按YES，保存图谱时除外。 13. 样品要事先处理好，保证样品澄清，需要过膜的，都必须严格用0.45μm滤膜过滤（注意区别水相用膜和有机相用膜）；保证样品pH落在使用柱的pH范围内。使用Eppendorf高速离心机时候，要注意对称平衡放好，离心管如有破裂应及时将离心机通道内残留的液体吸干。 14. 实验室严禁烟火，仪器由专人管理，使用仪器者必须进行操作培训和考核，并获负责人批准后，方可上机进行操作。 15. 仪器需防震动、防灰尘，废液倒卫生间，实验中人不能离开。
附2：Agilent液相色谱仪操作规程 ★样品与流动相要求：
1.样品临用前用0.45um滤膜过滤（区别水相膜与有机相膜），或者临用前离心取上清液（转速1万，20分钟) 2.缓冲溶液必须当天配制，每次使用前用0.45um的水相膜过滤，水要求使用当天的超纯水，甲醇或乙腈等有机溶剂要求使用色谱纯。流动相临用前超声脱气20分钟 ★液相开机操作过程：
1． 首先要启动电脑，进入Windows 后, 电脑在后台自动运行Agilent bootp Service。
2． 从上往下打开液相色谱仪各模块前左下方的电源开关，液相各模块进入自检，右上角的指示灯不同颜色闪烁几下，最后变成橘***(或灭掉ALS、RID)，启动完成。
3. 双击电脑桌面的Instrument 1 联机 图标，进入LC化学工作站（方法与运行控制界面）。
4. 调用或者编辑相应的操作方法。
★液相关机操作过程：
1. 根据具体情况，使用水或溶剂，泵流量设为1.0ml/min,把系统的管道及柱子清洗干净。
2. 根据具体情况，不定时把A、B、C、D通道用有机溶剂冲洗干净，防止生长藻类等。
3. 把系统关闭(即把泵停下来及检测器的灯灭掉等)，若有seal wash,把其清洗的水卡住。
4. 先退出LC化学工作站，从下往上关掉液相色谱仪各模块前左下方的电源开关。
5. 退出电脑Windows系统，关掉电脑电源。
★液相的数据采集操作过程：
1． 从化学工作站菜单的方法中编辑完整方法，或者调用方法, 一般是方法存在如D:\\CHEM32\\1\\METHODS\\___.M，即运行此方法。
2． 从化学工作站菜单的仪器的启动系统 ,可点击桌面上的启动按纽，也可以点每一模块图标中的控制来开或关。(若有手动Seal Wash 应先把打开，约每分钟20滴)
3. 手动进样或自动进样器单针进样时： 从运行控制中的样品信息输入样品信息 4. 待工作站提示 就绪 (变绿色)、仪器基线平衡稳定后:
手动进样: 若是VWD或DAD先按一下平衡,把基线调零，阀在Load的状态，
用注射针取样品从手动进样阀口注入，把手动阀转向Inject的方向，开始做样采集数据。
★注意事项： 1．C18反相柱一般适用于缓冲溶液PH值在2.2~7.8范围，超出范围柱子会损坏 2．柱温箱设置可低于室温10℃，最高80℃ 3．四元泵的比例阀有A、B、C、D四个通道，建议将盐溶液接在下面的通道（A或D），将有机溶剂接在上面的通道（B 或C）上，进样量应是定量环体积的4倍（定量环20ｕＬ，进样量80ｕＬ） 4．检测结束后，C18 反相柱用甲醇（脱气）冲洗柱子30分钟，若流动相是缓冲溶液时，还需先用纯水（脱气）冲洗系统60分钟，再用甲醇冲洗柱子30分钟，先用纯水再用甲醇清洗进样口 5．仪器由专人管理，需要在本仪器进行项目研究而使用仪器者，必须进行操作培训和考核，并获负责人批准，方可上机进行操作 6．上机者必须进行预约登记，一般情况下，需要提前一周预约用机时间 7． 仪器使用者需了解仪器的配置和安全事项。空气湿度应低于70%，室温20℃，仪器需防震动、防灰尘，使用过程如遇到异常情况，需及时向负责人报告，并做好记录 12．关机后立即清理实验台及地面，并对仪器使用情况、仪器状态如实进行登记 补充说明： 1.建立新的文件目录 首先在我的电脑D盘建立一个新的文件夹，个人建立的方法数据可以全部保存于该文件夹中，打开化学工作站，点击“方法和运行控制”模块，点击菜单中“视图”选项中“首选项”，添加所建立的文件夹确定。 2.数据保存 点击“数据分析”模块，点击菜单栏中“文件”选择“调用信号”，选择需要打开的数据[**.D]，在图谱上方点击打印图标形成PDF格式，再保存到指定文件夹中。若只需保存色谱图，则打开图谱后点击菜单栏“图形”选项中的“复制到剪贴版”，粘贴到word文档即可。
3.若色谱方法为梯度洗脱，则需设置后运行时间。 4.开机运行方法前，需进行泵和管道的冲洗，将冲洗阀逆时针旋松，设置流量5ml/min，冲洗15min，保证管道内无气泡。注意一定要将冲洗阀旋松，否则高流速会冲坏柱子。 5.设置检测波长参比值，根据样品中没有吸收值的某个波长值设定。 6.若使用联机软件时，需保证脱机软件关闭。
5 三亿文库包含各类专业文献、中学教育、应用写作文书、专业论文、生活休闲娱乐、17高效液相色谱仪器讲稿等内容。　
　三 、高效液相色谱的分类 吸附色谱法、分配色谱法、空间排阻色谱法、离子交换色谱法、亲和色谱法、化学键合相色 谱法 四 、高效液相色谱仪的基本构造 高效液相... 　高效液相色谱级乙腈的质量评价 信息来源:液色迷人 摘要: 高效液相色谱(HPLC)分析中,流动相溶剂的纯度和质量对分析结果和仪器本身都 有重要影响。 溶剂中的各种痕量... 　高效液相色谱仪器讲稿_小学作文_小学教育_教育专区 暂无评价|0人阅读|0次下载|举报文档高效液相色谱仪器讲稿_小学作文_小学教育_教育专区。液相色谱根据目前市场情况... 　液相色谱根据目前市场情况主要分进口和国产两大类,进口主要有美国产 Waters(实验室 存有 Waters1525 价格:35.6W) 、安捷伦(实验室存有 Aglient1200 价格 34.5W)... 　高效液相色谱仪分析应用实例 《高效液相色谱仪分析应用实例》由南京科捷为您收集提供,液相色谱应用实例包括环境气体分析、 药物分析、食品分析、生物制药等方面的液相... 　仪器分析笔记《高效液相色谱分析》._企业管理_经管营销_专业资料。第二章 高效液相色谱分析 §2.1 高效液相色谱法概述(掌握) 2.1.1 高效液相色谱法的特点 1、... 　高效液相色谱仪验证报告 验证类别:□ 首次验证 □ 再验证 设备名称:高效液相色谱仪 设备型号: 设备编号: 高效液相色谱仪验证报告 1/1 1、概述高效液相色谱法(... 　液相色谱仪使用与故障排查讲稿液相色谱仪使用与故障排查讲稿隐藏&& 我的分析生涯...这期间我用到了很多仪器,在今天, 我要聊聊我最喜欢的仪器---高效液相色谱。 ...小木虫 --- 600万学术达人喜爱的学术科研平台
热门搜索：
&&高效液相色谱仪跑完液相后该如何冲洗 卸柱 关机
高效液相色谱仪跑完液相后该如何冲洗 卸柱 关机
求指导！卸柱时需要把流速调为0吗？先卸进口还是出口？
先卸进样端还是出样端？
你未选择应助 无法评分 送你红花一朵，
学术必备与600万学术达人在线互动！
扫描下载送金币