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短暂性高血糖对大鼠肾细胞缺血再灌注损伤的影响
优质期刊推荐低血糖后葡萄糖再灌注性脑损伤机制的初步研究--《上海交通大学》2014年硕士论文
低血糖后葡萄糖再灌注性脑损伤机制的初步研究
【摘要】：目的：低血糖后过快的升糖速度可以引起葡萄糖再灌注性脑损伤，其机制还不十分清楚，本研究旨在探讨胰岛素诱导大鼠低血糖后，不同血糖升高速度引起大鼠低血糖后葡萄糖再灌注性脑损伤的机制。
方法：采用正常雄性SD大鼠36只，其体重控制在200g-300g，我们采用简单随机抽样分组的方式将36只实验大鼠分入6个组别，即空白组，假手术组，4组实验组，每个组别均有SD大鼠6只。空白组为不经过任何处理的大鼠，假手术组使用腹腔注射胰岛素方式的同时股静脉泵注25%葡萄糖，持续血糖监测并维持大鼠血糖在5.5mmol/L上下，4组实验组先经股静脉泵注胰岛素诱导低血糖后，使用推注泵按不同的速率泵注25%的葡萄糖，依据1小时后血糖升高的不同水平将4个组别分为1.0～3.0mmol/L组、3.0～6.0mmol/L组、6.0～9.0mmol/L组和＞9.0mmol/L组。我们使用Western Blot电泳方法分析并检测4个不同组别之间凋亡蛋白Bax及Bcl-2在各自大鼠皮层及海马神经细胞上积分光密度的比值，采用BD流式细胞仪技术检测4个不同组别之间大脑皮层及海马神经细胞内Ca2+的荧光强度的变化。使用双抗体夹心Elisa方法检测大脑皮层及海马神经细胞中α酮戊二酸脱氢酶（α-KGDHC）及聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1（PARP-1）在葡萄糖再灌注1小时及6小时后的含量及随时间的变化。应用SPSS18.0软件进行数据分析处理，P0.05时差异有统计学意义。
结果：（1）凋亡蛋白Bax/Bcl-2比值变化：与空白组及假手术组比较，4组实验组皮层及海马的Bax/Bcl-2比值明显升高，有显著的统计学差异（皮层：F=265.8，P0.05，海马：F=42.67，P0.05），四组实验组中＞9.0mmol/L组Bax/Bcl-2表达比值最大，1.0～3.0mmol/L组次之，与其他两组实验组之间有显著的统计学差异（皮层：F=212.1，P0.05，海马：F=27.38，P0.05），（2）钙离子荧光强度变化：与空白组及假手术组比较,4组实验组的钙离子的平均荧光强度明显升高，有显著的统计学差异（皮层：F=79.80，P0.05，海马：F=355.0，P0.05），四组实验组中＞9.0mmol/L组的钙离子平均荧光强度最大，1.0～3.0mmol/L组次之，与其他两组实验组之间有显著的统计学差异（皮层：F=50.08，P0.05，海马：F=71.13，P0.05）。（3）α酮戊二酸脱氢酶：葡萄糖再灌注1小时后，在皮层和海马组织中，1-3mmol/L组，空白组，假手术组之间α-KGDHC浓度没有显著性的差异，其他3个实验组与空白组有显著性的差异，在皮层中，后三组实验组相互比较有显著性的差异（F=10.68，P0.05）,使用SNK-q两两比较,其中9mmol/L组α-KGDHC浓度最低。在海马中,后三组实验组之间无显著性的差异（F=1.565，P0.05）。葡萄糖再灌注6小时后，1-3mmol/L组水平降低，其他三组水平升高（除皮层的6-9mmol/L组）。（4）聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1：在皮层与海马中，空白组与假手术组之间没有差异，4个实验组与空白组比较有显著性的差异，其中在皮层中，1-3mmol/L组，3-6mmol/L组之间没有显著性的差异，6-9mmol/L组次之，9mmol/L组相对其他三个实验组都有显著性差异，PARP-1的浓度是最低的，在海马组织中，1-3mmol/L组与3-6mmol/L组之间没有显著性的差异,6-9mmol/L组与9mmol/L组之间没有统计学差异，PARP-1的浓度是最低。葡萄糖再灌注6小时后，除了皮层的1-3mmol/L组，其余PARP-1浓度都有所升高。
结论：升糖速度引起低血糖葡萄糖再灌注脑损伤的机制与凋亡基因Bax及Bcl-2的表达、细胞内钙离子超载、α-KGDHC及PARP-1酶的改变有关。
【关键词】：
【学位授予单位】：上海交通大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2014【分类号】：R651.15【目录】：
摘要6-8Abstract8-10英文缩略语10-12目录12-141 绪论14-162 材料与方法16-26 2.1 实验材料16-18
2.1.1 实验动物16
2.1.2 实验试剂16-17
2.1.3 实验器材17-18 2.2 主要试剂及液体的配制18-20 2.3 采用主要软件20-21 2.4 实验方法21-26
2.4.1 动物模型的制作与分组21-22
2.4.2 标本的取材22-23
2.4.3 Westernblot 实验过程23-24
2.4.4 钙离子浓度检测过程24-25
2.4.5 α酮戊二酸脱氢酶及聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1 的检测过程25-26
2.4.6 统计分析263 实验结果26-42 3.1 Bax/Bcl-2 的结果26-30
3.1.1 各组皮层神经细胞中 Bax/Bcl-2 比值统计学结果27-29
3.1.2 各组海马神经细胞中 Bax/Bcl-2 比值比较统计学结果29-30 3.2 钙离子检测结果30-33
3.2.1 各组皮层神经细胞 Ca2+浓度统计学结果31-32
3.2.2 各组海马神经细胞 Ca2+浓度统计学结果32-33 3.3 α酮戊二酸脱氢酶及聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-11 小时的结果33-38
3.3.1 α酮戊二酸脱氢酶在皮层与海马细胞中的结果33-35
3.3.2 聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1 的结果35-38 3.4 α酮戊二酸脱氢酶及聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-16 小时的结果38-42
3.4.1 α酮戊二酸脱氢酶 6 小时结果38-40
3.4.2 聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-16 小时的结果40-424 讨论42-475 结论47-48参考文献48-52致谢52-53学术论文和科研成果目录53
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糖尿病患者早期 MSCT 肾脏血流灌注特点与空腹血糖的相关性分析
目的：利用多层螺旋 CT(MSCT)灌注扫描探讨糖尿病(DM)患者早期肾脏血流灌注变化特点,及其与空腹血糖的关系。方法对30例符合临床诊断标准的2型糖尿病(T2DM)病程5年内患者[糖尿病肾病(DN)血糖控制不良组与 DN 血糖控制良好组各15例],以及正常对照组15例,使用64层螺旋 CT 行双侧肾脏灌注扫描,获得各组双肾皮质灌注参数：血流量(BF)、血容量(BV)、平均通过时间(MTT)、毛细血管表面通透性(PS),同时测量各例的灌注前及灌注后第3天空腹血糖、血尿素氮、血肌酐、血尿酸数值,并估算其肾小球滤过率(C-GFR),将所获得数值进行统计分析。结果(1)DN 血糖控制不良组的平均 BF、平均 BV、平均PS 值减低,平均 MTT 明显延长,平均 BF、平均 MTT 与正常组比较有统计学意义(P &0.05)；DN 血糖控制良好组平均 BF、平均BV 值增高,平均 MTT 延长,与正常组比较均有统计学意义(P &0.01),DN 血糖控制不良组与 DN 血糖控制良好组比较,平均 BF、平均 BV 值减低,平均 MTT 延长,均有统计学意义(P &0.01)。(2)空腹血糖与平均 BF、平均 MTT 相关性最高,并与肾脏灌注参数存在线性相关。(3)正常对照组、DN 组肾脏 CT 灌注成像检查前、后第3天肾小球滤过率无统计学意义(P &0.05)。结论MSCT 肾脏灌注指标 BF、BV、MTT 可反映早期糖尿病肾脏血流灌注特点,空腹血糖影响肾脏的平均 BF、平均 MTT。
Abstract：
Objective To explore the change characteristics of early renal blood infusion in patients with diabetes and its relation-ship with fasting blood sugar by using multi-slice spiral CT (MSCT)perfusion scan.Methods Thirty cases of T2DM patients within five years of disease course that meet clinical diagnostic criteria (poor DN glycemic control group and good DN glycemic control group with 1 5 cases in each group)and 1 5 cases in the control group underwent bilateral renal perfusion scan using 64-detector spiral CT,thus obtaning their cortical perfusion parameters of bilateral kidneys,including blood flow (BF),blood volume (BV),mean transit time (MTT)and capillary permeability surface (PS).At the same time,for each case,fasting glucose,blood urea nitrogen, serum creatinine and blood uric acid value on the third days after and before perfusiothe glomemlar filtration rate (C-GFR)was estimated.Statistical analysis was performed on all of these obtained values.Results (1).For the poor DN gly-cemic control group,the average BF value,average BV value and average PS value were reduced,average MTT was prolonged sig-nificantly,and compared with normal group,average BF value and average MTT were statistically significant (P &0.05);for good DN glycemic control group,average BF value and average BV value were increased,the average MTT was prolonged,and compared with the normal group,the difference was statistically significant (P &0.01);compared with the good DN glycemic control group, the average BF value and average BV value of the poor DN glycemic control group were significantly reduced,and the average MTT was significantly prolonged.(2).Fasting blood glucose had the highest correlation with average BF and average MTT and was linear-ly dependent with renal perfusion parameters.(3).The glomemlar filtration rate was not statistically significant (P &0.05)for both normal control group and DN groups in the third day before and after renal CT perfusion imaging examination.Conclusion BF,BV and MTT of MSCT perfusion scan can reflect the characteris-ticsof early renal blood infusion in patients with diabetes.And changes of fasting blood sugar in patients with diabetes may influence mean BF and mean MTT of kidney.
LONG Liling
LIU Chunbin
作者单位：
广西医科大学第一附属医院放射科,广西 南宁,530021
广西卫生职业技术学院
年，卷(期)：
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机标分类号：
在线出版日期：
基金项目：
广西自然科学基金项目(桂科青0991027)。
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