提纯蛋白质时盐析法与有机溶剂法的优缺点
提纯蛋白质时盐析法与有机溶剂法的优缺点
从细胞中提取出来的生物大分子是不纯净的,必须进一步分离纯化才能获得纯品.在生物大分子制备工作中,分离纯化是比较复杂和重要的一个环节.对于异类的物质,如提纯蛋白质和酶时混杂着核酸,提纯核酸时混杂着蛋白质或多糖,一般可用专一性酶水解、有机溶剂抽提、选择性分部沉淀等方法处理,小分子物质常在整个制备过程中多次液相与固相互相转化被分离或最后用透析方法除去.而对同类物质,如酶和杂蛋白,RNA和DNA以及不同结构的蛋白质、酶、核酸之间的分离,情况则复杂得多,主要应用的方法有盐析法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法、吸附法、结晶法、电泳法、超速离心法、柱层析法等.其中盐析法、等电点法、结晶法用于蛋白、酶的提纯较多；有机溶剂抽提和沉淀用于核酸提纯较多；柱层析法、梯度离心法在蛋白质和核酸的提纯工作中应用均十分广泛.
与《提纯蛋白质时盐析法与有机溶剂法的优缺点》相关的作业问题
所谓“盐析”要盐加的足够多才有用呢.盐析的原理：蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度,以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的.当用中性盐加入蛋白质溶液,中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质,于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失.同时,中性盐加入蛋白质溶液后,由于离子强度发生改变,蛋白质表面电荷
1.你说的现象叫等电点沉淀法.蛋白质是带电荷的,有的带正电,有的带负电,因此蛋白质溶液能够稳定存在地原因之一是由于蛋白质分子或其他溶液中成分因为带相同电荷尔相互排斥,不会凝聚或絮凝.每种蛋白质都有等电点,在此pH值条件下,蛋白质不带电荷.因此破坏了原来蛋白质溶液中由于带电荷互相排斥而稳定溶解的状态.因此,此时的蛋白质溶
因为蛋白质在其等电点处,溶解度最低,这时候更利于目标蛋白质的沉淀,提取分离更为彻底.
请查看操作步骤是否正确.溶液pH值越接近蛋白的等电点,蛋白质越溶液沉淀.盐析法是在中药水提液中,加入无机盐至一定浓度,或达饱和状态,可使某些成分在水中溶解度降低,从而与水溶性大的杂质分离.常作盐析的无机盐有氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等.例如自黄藤中提取掌叶防己碱,自三颗针中提取小檗碱在生产上都是用氯化钠或硫酸铵盐析
蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度,以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的.当用中性盐加入蛋白质溶液,中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质,于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失.同时,中性盐加入蛋白质溶液后,由于离子强度发生改变,蛋白质表面电荷大量被中和,更加导致蛋白溶解度降低,使蛋白质分子
蛋白质表面有一层水膜将蛋白质分子彼此隔开,从而避免分子间发生凝聚沉淀,盐析的原理就是盐离子破坏了水膜,是蛋白质分子发生凝聚沉淀.
"四原则”是：一不增(提纯过程中不增加新的杂质)；二不减(不减少欲被提纯的物质)；三易分离(被提纯物与杂质容易分离)；四易复原(被提纯物质要复原).
冷却热饱和溶液 法提纯硝酸钾
透明质酸中的蛋白质指的是一种蛋白聚糖中的蛋白质吗,是否应该考虑除去其中的糖胺聚糖,将蛋白质纯化,因为考马斯亮蓝需要与蛋白质结合才能显色,样品中的糖胺聚糖可能有影响,或者是样品污染考马斯亮蓝溶液应为酸性,并且变成蓝绿色是就不能再使用了实验时一定要最后加入蛋白质溶液,另外,样品中的Tris、乙酸、2-巯基乙醇、EDTA等物
少量无机盐（铵盐、钠盐等）能促进蛋白质的溶解,加浓的无机盐溶液可使蛋白质的溶解度降低,而析出不变性,加水重新溶解.在高温、酸、碱、重金属盐、有机溶剂等作用下会变性,此时析出的蛋白质加水不再溶解.
盐析法提取的蛋白纯度差,进一步纯化需要进行离子交换分离或者凝胶过滤吧,就是过柱子,可以使用蛋白纯化系统.不知道你的“提高其纯化倍数”是不是这个意思.
提高溶液温度、催化剂和指示剂、40g/L硼酸、盐酸
盐析可以提纯蛋白质,变性不可以哦~轻金属盐可以使蛋白质析出哦~变性使蛋白质的空间结构都发生改变了,所以功能一定招到破坏,提取出来的也是已经被破坏掉的蛋白质哦~所以不能提纯蛋白质哦~
“盐析可以提纯蛋白质并保持其生理活性”为什么可以保持生理活性?不会变性盐析可以使蛋白质沉淀,破坏蛋白质表面的水化层,但蛋白质的结构不会被破坏
空白试验引入了杂质含氮物质,或者容器未清洗干净,洗净容器再重新做一遍
蛋白质在轻金属盐中的溶解度小于水中的溶解度,析出的蛋白质可以重新溶解,(不可以在浓酸、浓碱或重金属盐中进行),这样就像重结晶一样把一些没有这种性质的物质分离开了,这就是盐析的基本原理.
1、不相同2、前者是复***反应：NaCl + NH3 + CO2 +H2O =NaHCO3 +NH4Cl3、后者的原理是“胶体的性质”,蛋白质溶液是一种胶体,胶体遇电解质溶液会发生聚沉.4、蛋白质溶液遇中金属盐会发生变性,加热、强酸、强碱、紫外线等也这样!
白色沉淀可能是不溶于酸的硫酸盐,比如微溶的MgSO4、CaSO4或不溶的BaSO4.不影响N的测定.
.自己以后要多看资料,这是自己判断的事情. 这个比例其实都行,没有绝对的对错.你就选择1：4 震荡时间自己决定,应为如果你要拖干净的话,也可以多次每次时间短啊,这个和时间长次数少效果是一样的. 离心好!并且告诉你样品稍微多准备点,如果你的样品蛋白质含量高,你去蛋白次数过多的话,你的样品会在反复的转移中损失很大. 顺便带