二、混合淋巴细胞培养
混合淋巴细胞培养（MLC）或称混合淋巴细胞反应（MLR）以往为用于***移植前的组织配型，以测定受体和供体主要组织相容性抗原（HLA抗原）相容的程度。由于MLC中淋巴细胞接受同种异型抗原的刺激而发生活化、增殖，产生种类众多的细胞因子，促进NK、LAK和CTL等杀伤细胞的分化，因此MLC又是免疫调节研究中常用的实验模型。
两个无关个体功能正常的淋巴细胞在体外混合培养时，由于HLAⅡ类抗原不同，可相互刺激对方的T细胞发生增殖，此外双向混合淋巴细胞培养（two
MLC）；若将其中一方的淋巴细胞先用丝裂酶C处理或射线照射使之细胞中DNA失去复制能力，但仍能刺激另一方淋巴细胞发生转化，称为单向混合淋巴细胞培养（one
MLC）。两个个体间HLA抗原差异程度越大，反应越强烈，可通过细胞数量、形态检查或3H-TdR掺入率检测反应细胞的增殖水平。EB病毒转化的B淋巴细胞表达高水平的HLAⅡ类抗原，常作为单向混合淋巴细胞培养中的刺激细胞。
&&试剂器材
1．细胞：刺激细胞N23细胞系，反应细胞：外周血单个核细胞。
&&& 2．10%FCS
RPMI 1640培养基。
3．照射源：60Co装置
4．细胞培养瓶、培养板、滴管、吸管等。
5．CO2孵箱、超净台。
1．刺激细胞的准备：常用的刺激细胞有EB病毒转化的B淋巴细胞（如N23细胞）或PBMC。取处于对数生长期的N23细胞，离心后重悬于新鲜完全培养基中，调整细胞数为1×106/ml~2×106/ml，移置于塑料培养瓶或者50ml离心管中，用60Co照射3000rad。
2．反应细胞的准备：分离纯化待检个体的PBMC。
LC：按2×106PBMC与1×105经3000rad照射的N23细胞的比例，重悬于4ml10%FCS
1640,放置于小培养瓶中进行MLC，培养瓶保持直立，培养4d内不要晃动，第5d加入1ml新鲜培养基。如要测定3H-TdR掺入率，一般可在MLC的第5d进行；如要检测MLC中NK、LAK或特异性杀伤性T淋巴细胞（CTL），一般在7~10
d左右收获效应细胞。杀伤细胞功能检测参见本章“自然伤细胞和淋巴因子激活的杀伤细胞的杀伤功能”，所不同的是CTL的靶细胞选用作为刺激细胞的N23细胞。
1．注意无菌操作
2．刺激细胞接受照射剂量要准确，是细胞暂时存活，但失去增殖的能力。
3．可用RAJI或Daudi细胞作为刺激细胞，也可将不同的细胞混合作为刺激细胞。不同刺激细胞与反应细胞的合适比例有所不同，应做预实验选择最佳的实验条件。
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Chinese Science Abstracts(Chinese Edition)
Vo.,No. 研究. 图 参 l(苏月来) 关键词:移植物抗宿主病;造血干细胞移植,异种;小鼠, NOD/SCID OlllO
·l 延迟连续骨髓移植对主要 H一 不合小鼠移植后急性移植物抗宿主病的影响=Effect of delayed sequential bone marrow transplantation on acute graft·-versus·-host disease in major H-- patible mouse transplantation [刊,中]/二E春玲(徐州医学院附属医院血液科,徐州 ),徐开林,潘秀英,杜冰∥中华血液学杂志.一o,().一~ 研究延迟连续骨髓移植对主要 H一不合小鼠移植后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的影响. 以近交系 CBL/(H一 )小鼠为供鼠、BALB/c(H. )小鼠为受鼠,受鼠接受总剂量为 . Gy oco 射线全身照射(TBI)后,实验分为 组:①空白对照组(只输注 . mL RPMI );②经典移植组(TBI后
h输注);③连续移植组(TBI后
h,、、 d连续输注);④延迟移植组(TBI 后
d输注):⑤延迟连续移植组(TBI后 、、、 d连续输注).移植后用流式细胞术检测各组受鼠 H. 细胞植入水平, ELISA法测定 IL一、IL一、IL一、IL一、IFN
的血浆浓度, 比较各组的生存率、aGVHD 发生情况及造血重建情况.经典移植组出现典型 aGVHD 表现,均于 周内死亡,连续移植组、延迟移植组
d生存率分别为 %、%,延迟连续移植组出现 aGVHD 的小鼠数量少、程度轻, d存活率 %,高于其他组(尸&.).延迟移植组和延迟连续移植组血浆 IL一、IFN一、 IL.、IL.分泌高峰较经典移植组延迟 ~ d,IL一、Ⅱ,l的表达高于经典移植组(尸&.),IL一、IFN.
的表达低于经典移植组(尸&.).各组血浆 IL一浓度均于 TBI后 ~
d达高峰,且经典移植组的表达高于其他组(尸&.).延迟连续移植组 d时 H
细胞的卣分率为(.±.)%,d时外周血白细胞计数恢复正常.延迟连续骨髓移植可减轻小鼠异基因移植后的 aGVHD,提高生存率,不影响骨髓植入和造血重建,是合适的移植方式,其减轻 aGVHD 机制可能与减少 T细胞 I类细胞因子分泌,促进 II类细胞因子分泌有关.图
表 l参 (苏月来) 关键词:骨髓移植:移植物抗宿主病;小鼠 O
· 人骨髓基质细胞促进脐血 CD
细胞的体外扩增和对 NOD/SCID 小鼠的植入=Human bone marrow stromal cells facilitate the cord blood CD
cells ex vivo expan sion an d short-- term engraftment in NOD/SCID mice[刊,中]/费小明(南京医科大学第一附属医院,南京 ),吴雨沽,常在,缪扣荣, 周小玉,潘芹芹,汪承亚∥中华血液学杂志.--,().一 ~
研究人骨髓基质细胞(Msc)促进脐血 CD 细胞体外扩增及植入能力的作用. 分离、培养正常人的 MSC作为滋养层细胞. 在 TPO、SCF、FL和 G.CSF刺激下,比较有、无 MSC滋养层细胞对扩增脐血 CD 细胞后,CD
细胞和 CFU 数的增加倍数, 以及植入非肥胖性糖尿病/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)dx鼠的能力. 以骨髓 MSC 为滋养层细胞的培养体系可以更加有效地扩增脐血 CD
细胞.体外扩增 周总细胞数(TNC)、CD 细胞和 CFU 的均数分别增加 ll.、. 和 .倍;体外扩增 周后 TNC、CD
细胞和 CFU 的均数分别增加 .、.和 .倍.脐血细胞输入 NOD/SCID 小鼠 周后,移植未扩增脐血细胞的对照组小鼠骨髓细胞中人 CD
细胞比例仅为 .%~.%:移植单纯细胞因子刺激扩增组小鼠骨髓中,人 CD
细胞比例为 .%~.%;以 MSC 为滋养层扩增的脐血细胞移植组,人 CD
细胞比例达到 .%￣.%.以人骨髓 MSC为作为饲养层细胞,不但可以更加有效扩增脐血 CD 细胞,而且可以促进脐血细胞植入 NOD/SCID小鼠的能力,有潜在的临床应用价值.参 l(苏月来) 关键词:胎血造血千细胞;扩增;骨髓基质细胞
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关键词:树突状细胞;骨肉瘤;RNA;肿瘤免疫;疫苗
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