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合在一起与一抗结合后,直接用底物进行显色的方法此方法由于简單、快速、敏感性强且避免了内源性生物素所造成的背景染色,以有逐渐取代其他免疫酶组织化学检测方法的趋势

1石蜡切片脱蜡至PBS。

7 DAB(0.04%)显銫(镜检控制)水洗、复染、封片

二·sp法是一抗+生物素化二抗+HRP标记的链霉卵白素(HRP标记的亲和素)

一般的sp法步骤啊,具体如下:

4. 抗原修复:置0.01M枸橼酸缓冲液(PH 6.0)中用煮沸(95℃,15-20min)自然冷却20min 以上,再用冷水冲洗缸子加快冷却至室温,PBS冲洗3X5min

5. 正常羊血清工作液封闭,37℃10 min倾去勿洗.

6. 滴加一抗4℃ 冰箱孵育过夜,PBS冲洗3X5min(用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照);

7. 滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液37℃孵育30min, PBS沖洗3X5min;

8. DAB/ H2O2反应染色,自来水充分冲洗后

苏木素复染,常规脱水透明,干燥封片。

灵敏度高而极易控制背景的检测系统试剂盒是最为理想吔是免疫组化染色优劣的关键根据免疫组化技术发展至今PV系列及SP试剂盒更优于其它试剂盒。检测系统应与一抗来源相匹配否则检不出目的物。如一抗是鼠单或多抗的二抗就应该是羊或兔抗鼠的。

四·建议选SP亦可根据实验室习惯及在组织中的表达情况来定

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参考资料

 

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