种夹竹桃的道士--《课外阅读》2015年01期
种夹竹桃的道士
【摘要】：正钱穆先生青年时有一天路过山西的一座古庙,看到一位老道士正在清除庭院中一棵枯死的古柏。钱穆好奇地问:"这古柏虽死,姿势还强健,为什么要挖掉呢?"老道士说:"要补种?的树!"钱穆问:"种一棵什么树呢?"道士说:"夹竹桃。"钱穆大为惊异:"为什么不种松柏,要种夹竹桃呢?"老道说:"松柏树长大,我看不到了;夹竹桃明年就开花,
【关键词】：
【分类号】：G634.3【正文快照】：
钱穆先生青年时有一天路过山西的一座古庙,看到一位老道士正在清除庭院中一棵枯死的古柏。钱穆好奇地问:“这古柏虽死,姿势还强健,为什么要挖掉呢?”老道士说:“要补种?的树!”钱穆问:“种一棵什么树呢?”道士说:“夹竹桃。”钱穆大为惊异:“为什么不种松柏,要种夹竹桃呢?”
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京公网安备75号【夹竹桃科】12种夹竹桃科植物的RAPD分析_牛宝宝文章网【夹竹桃科】12种夹竹桃科植物的RAPD分析专题：第34卷第3期2007年9月福建林业科技Vol134　No13Sep1,2007JourofFujianForestrySciandTech12种夹竹桃科植物的RAPD分析黄久香1,张寿洲2,庄雪影1,李秉滔1(11华南农业大学林学院,广东广州深圳仙湖植物园,广东深圳518000)摘要:从80个随机扩增多态性DNA(RAPD)随机引物中筛选出22扩增,探讨夹竹桃科(Apocynaceae)10属12种植物的遗传关系。获得162’sNTSYS程序UPGMA法构建了系统发育树。黄蝉(AllamandaschottiiPohl1)1)Plumeriarubra)012种植物划分为10个属,并L1)与鸡蛋花(P1rubraL1‘Acutifolia’在0158处分为3支,但并不完全支持3,可为夹竹桃科系统分类学提供分子生物学的证据关键词:夹竹桃科;):　　　文章编号:07)03-0014-05RAPDanalysisoftwelvespeciesofApocynaceaeHUANGJiu2xiang1,ZHANGShou2zhou2,ZHUANGXue2ying1,LIBing2tao1(1.SouthChinaAgriculturalUniversity,Guangzhou,Guangdong510642,C2.XianhuBotanicalGarden,Shenzhen,Guangdong518000,China)Abstract:Twelvespecies,belongingto10generaofApocynaceae,wereanalyzedbyrandomamplifiedpolymorphicDNA(RAPD)markers.162locigeneratedby22clearandrepeatedandpolymorphicprimers,whichscreenedfrom80primers.AcloserelationwasfoundbothbetweenAllamandaschottiiPohl.andA.catharticaL.andbetweenPlumeriarubraL.andP.rubraL.‘A2cutifolia’.TheUPGMAdendrogram,whichbasedonNei’ssimilaritycoefficientsandconstructedbyNTSYSprograms,wascon2sistentwiththatofclassicalclassification.Tengeneraweredistinguishedatthesimilaritycoefficientsof0.73,and3branchesweredistinctat0.58whilenotcompletevestin3substantivesubfamily.Consequently,RAPDisausefultechniqueinthephylogeneticanalysisofApocynaceae.Keywords:ARAPD;phylogenetics分子标记已被广泛应用于植物系统发育研究,其中随机扩增多态性(RAPD:RandomAmplifiedPloy2morphicDNA)标记因价格低廉、简便快捷,是研究生物遗传多样性和亲缘关系的重要方法之一[1,2]。RAPD标记在系统学上的应用,早期有着不同的看法,主要集中在位点的可重复性和同源性上,经国内外科学工作者验证,认为严格标准化实验条件,其重复性是可以完全保证的,而且近缘种共迁移位点多是同源的[3,4]。近年来,杨瑞武等[5]利用RAPD技术评价了鹅观草属(Roegneria)、披碱草属(Elymus)、猬草属(Hystrix)和仲彬草属(Kengyilia)植物的属间关系及其系统学意义;汪小全等[6]对升麻属(Cimicifuga)、类叶升麻属(Actaea)和乌头属(Aconitum)进行了属间遗传分类,结果与经典分类的研究结果相吻合;De2[7]meke等研究了芸苔属(Brassica)6个种及其与萝卜属(Raphanus)和欧白兰芥属(Sinapis)之间的系统关系,主成分分析的结果与经典分类结果一致;Fritsch等[8]在Datisca、Helianthus、Yuucca3个属中进行RAPD扩增,结果显示3个属具有较高的相似性;Chalmers等[9]分析了楝科(Meliaceae)4个属8个种之间的遗传变异程度,结果与现行的分类学观点一致;邓白罗等[10]对山茶属红山茶组29种植物亲缘关系进行了研究,得到满意结果和效果;这些表明,RAPD标记不仅可以用于植物种内遗传分析,也可用于种间及至属间的分类学研究。收稿日期:基金项目:华南农业大学博士启动基金()作者简介:黄久香(1975-),女,湖南绥宁人,华南农业大学讲师,博士,从事林学教学和科研工作。通讯作者:李秉滔(1936-),男,华南农业大学教授,从事植物经典分类研究。第3期黄久香,等:12种夹竹桃科植物的RAPD分析?15?夹竹桃科是热带植物区系主要植物成分,由于该科植物代表了独特的进化类群及其重要的经济价值,该科的系统地位和科内属间关系的研究一直是植物系统学家的研究热点[11]。分子系统学研究方面,En2dress等[12-14]和Potgieter[15]等分别测定了该科部分代表属代表种的叶绿体rbcL、matK和trnL基因内区与trnL2F间隔区序列,Liede[16]分析了Astephaninae亚族的叶绿体基因trnT2L、trnL2F及trnL间隔区序列,并构建了各自的系统树,为一些有争议的属的界限划分、系统位置的确定提供了叶绿体分子生物学证据,但核基因的分子系统学研究目前还未见报道。我国是夹竹桃科植物种类较多的国家之一,有44～46属,145～176种,及台湾省等沿海岛屿,少数分布于北部及西北部[17],但我国这方面的研究主要集中在花部结构、[18],[19],且Endress&Bruyns[14]究,RAPD技术对中国常见的10属12据。1　111　材料来源从华南农业大学校园内采集海芒果(CerberamanghasL1)、黄花夹竹桃(ThevetiaeruvianaK1)、Schum1)、红鸡蛋花(PlumeriarubraL1)、鸡蛋花(P1rubraL1‘Acutifolia’蕊木(KopsiaarboreaBlume)、倒吊笔(WrightiapubescersR1Brown)、狗牙花(Tabernaemontanadivaricata(L1)R1BrownexRoemer&Schultes)、夹竹桃(NeriumoleanderL1)、黄蝉(AllamandaschottiiPohl1)、软枝黄蝉(A1catharticaL1)、羊角拗(StrophanthusdivaricatusHook1etArn1)、长春花(Catharanthusroseus(L1)G1Don)等12种夹竹桃科植物材料,每种植物采集5个个体,凭证标本存于华南农业大学林学院植物标本馆(CANT)。112　植物DNA提取取约0125g新鲜叶片,在液氮中迅速研磨成粉末,装入115ml的eppendorf管中,加入已预热到65℃μ的800μL2×CTAB溶液(含15μL10%(W/V)PVP和5Lβ-巯基乙醇),充分混匀,在65℃水浴30～60冷却至室温后,加入等体积氯仿(V)∶异戊醇(V)=24∶1有机溶剂,摇动10min,11000r?min-1离心10min,取上清液转入新eppendorf管中,重复有机溶剂混匀至取上清液步骤1次;取上清液加2倍体积的无水乙醇,轻轻混匀,-20℃静置30min,8000r?min-1离心5min,去上清液,加70%的乙醇洗5～10min两次,去上清,自然晾干;沉淀用200μLTE溶解。DNA浓度用琼脂糖比色法与标准浓度的λDNA比较确定。113　引物筛选对购自上海生物技术工程公司的80个RAPD引物进行筛选,将22个扩增产物分离效果和重复性良好的引物(表1)用作PCR实验。表1　引物及其序列引物S82S85S86S89S91S104S112)序列(5’-3’GGCACTGAGGCTGAGACGGAGTGCCTAACCCTGACGTCACTGCCCGTCGTGGAAGTCGCCACGCGCATGT引物S127S129S135S140S147S157S159)序列(5’-3’CCGATATCCCCCAAGCTTCCCCAGTACTCCGGTCTAGAGGAGATGCAGCCCTACTGCCGTACGGCGTATG引物S161S164S166S167S169S170)序列(5’-3’ACCTGGACACCCGCCTAGTCAAGGCGGCAGCAGCGACAAGTGGAGAGCAGACAACGCGAG?16?福建林业科技第34卷114　DNA扩增扩增反应在Eppendorf梯度PCR扩增仪上进行。反应体积20μL,包括2μL(20～150ng)DNA模板,PCR缓冲液210μL(含115mmol?L-1Mg2+),引物0175μL(4pmol),TaqE012μL(1U),dNTPs210μL(dNTP各为011μmol),灭菌的双蒸水13105μL。扩增条件:94℃预变性394℃变性35s,36℃复性1min,72℃延伸2min,45个循环;72℃延伸7min。每次扩增均设置不含DNA模板的空白对照。RAPD产物经115%琼脂糖凝胶电泳(加溴化乙锭至015μg?mL-1)分离,最后在紫外灯下用凝胶成像系统拍照记录。115　结果记录和数据分析以100bp的Marker作为分子量标准,,点记为“0”,在所有位点1/0数据矩阵基础上,Nei氏遗传相似性系数矩阵,,(UPGMA,unweightedpairgroupmethodwitharithmetic)[21]。2　211　22个引物共扩增出162条谱带(图1),平均每个引物扩增714条谱带,其中22条为共有谱带,140条谱带表现出多态性(8614%),反映了该科植物具有较明显的遗传差异。图1　由引物S147,S82扩增生产的RAPD带型(M:100bpM1海芒果;2黄花夹竹桃;3鸡蛋花;4红鸡蛋花;5蕊木;6倒吊笔;7狗牙花;8夹竹桃;9黄蝉;10软枝黄蝉;11羊角拗;12长春花;13对照)212　UPGMA聚类结果与分析Nei氏遗传相似性系数表明,同属或同族的种类亲缘关系较近。鸡蛋花属鸡蛋花的原变种(Plumeria)具白色花冠,RAPD分析结果显示它们之间具有较高rubra)具红色花冠,其变种(P1rubraL1‘Acutifolia’的遗传相似性,遗传相似性系数达01814;同样,同处一个属的黄蝉与软枝黄蝉也有01740的遗传相似性系数;黄花夹竹桃(黄花夹竹桃属)与长春花(长春花属)之间的遗传相似性系数最小,为01414(表2)。UPGMA聚类树系图显示:夹竹桃族的夹竹桃和羊角拗在相似系数01675处聚为一支;萝芙木族的海芒果与黄花夹竹桃在相似系数01650处聚在一起;在遗传相似性系数0173处12种植物区分到属,并在遗传相似性系数0158处,10个属分为3大分支,同属鸡蛋花亚科的萝芙木族(海芒果和黄花夹竹桃)与黄蝉族(黄蝉与软枝黄蝉)聚在一起成为一支;鸡蛋花族的鸡蛋花及其变种与萝芙木族的蕊木先相聚,然后与鸡蛋花族的长春花聚为另一支鸡蛋花亚科分支;夹竹桃族的夹竹桃和羊角拗,与倒吊笔族的倒吊笔和狗牙花第3期黄久香,等:12种夹竹桃科植物的RAPD分析?17?族的狗牙花组成夹竹桃亚科分支(图2)。表2　任意2种植物间的Nei氏遗传相似性系数物种号112801515157314591015031234567891011123:1。3　讨论海芒果(属)与黄花夹竹桃(属)均属萝芙木族,它们具有互生叶和核果,雄蕊着生在花冠筒的喉部,花药卵圆形,雄蕊与柱头分离,种子无毛等,在夹竹桃科都是比较原始的形态特征,因此,在传统形态分类学中认为这2个属有着共同的起源,处在同一演化水平[22]。本研究RAPD聚类结果同样反映了这2种植物具有较高的遗传相似性,在相似性系数01650处聚在一起(图2),反映了其较近的亲缘关系。海芒果与黄花夹竹桃所在的萝芙木族与黄蝉属所在的黄蝉族在传统形态分类学上具有并列的系统地位,它们是鸡蛋花亚科中关系密切的2个族,除了图2　基于Nei氏遗传相似性系数的UPGMA树系图它们在花部形态上具有以上共同特征外,黄蝉族植物具单心皮子房和蒴果,比萝芙木族2个心皮子房和核果在形态上较进化[22]。本研究RAPD研究分析也表明海芒果、黄花夹竹桃和黄婵之间的遗传相似程度较高(表2),海芒果和黄花夹竹桃首先聚在一起,然后和黄婵所在的分支相聚(图2)。在传统形态分类学中,夹竹桃和羊角拗均隶属于夹竹桃族,2种植物的雄蕊均为箭头状,着生在花冠筒的基部,雄蕊与柱头连生或靠合,果实均为　　果,种子具长种毛,这些特点都基本反映了夹竹桃科中较进化的形态特征[22]。本研究RAPD分析结果也显示这2个种之间具有较高的相似性系数(01675,表2),首先聚在一起(图2)。对于夹竹桃科内亚科的划分,不同学者具有不同观点,但随着时间推移,研究手段的不断进步和资料的积累丰富,人们认知科学逐渐深入,多数学者认为本科应该分为鸡蛋花亚科和夹竹桃亚科2个亚科[18]。从遗传相似性系数的UPGMA聚类树系图可以看到,鸡蛋花族和萝芙木族内的不同属相互交错,族内属间的关系并不十分紧密,与其他研究结果类似[18];同时可以看到,在遗传相似性系数0158处,10个属分为3大分支,鸡蛋花亚科占了2支,海芒果为亲近地进入其中一分支,但狗牙花族却进入夹竹桃亚科分支(图2),与李红和何平的形态学数量分析认为狗牙花族应进入鸡蛋花亚科不同[18],这也许跟本研究取材有限有关,需要扩大物种选取,做进一步的分析。?18?福建林业科技第34卷因此,本研究结果反映出RAPD标记可以区分夹竹桃科种内等级(鸡蛋花和红鸡蛋花)、种间等级(黄蝉和软枝黄蝉)乃至近缘属间(海芒果属、黄花夹竹桃属和黄蝉属之间;夹竹桃属和羊角拗属之间)植物在遗传相似性方面不同程度的相似性/差异性,可以为进一步开展该科植物系统学和遗传多样性研究提供信息资料和参考依据。3:本文实验在深圳仙湖植物园分子生物学实验室进行,文章写作中得到中科院华南植物园李忠超先生大力帮助,在此表示衷心的感谢!参考文献:[1]SoltisPS,SoltisDE,DoyleJJ1Molecularsystematicsofplants[M]1Y[2]WilliamsJGK,KubelikAR,LivakKJ1DNAasgeneticmarkers[J]1NucleicAcidsResearch,1-65351[3]ThormannCE,FerreiraME,al1PandRAPDmarkerstoestimatinggeneticrelation2shipswithinandandAppliedGenetics,-9801[4]邹喻萍,[M]1北京:科学出版社,-2661[5]杨瑞武,1RAPD分析披碱草属、鹅观草属和猬狎草属模式种的亲缘关系[J]1西北植物学报,)-1[6]汪小全,邹喻苹,张大明,等1RAPD应用于遗传多样性和系统学研究中的问题[J]1植物学报,):954-9621[7]DemekeT,AdamsRP,ChibbarR1PotentialtaxonomicuserandomamplifiedpolymorphicDNA(RAPD):AcasestudyinBras2sica[J]1TheoreticalandAppliedGenetics,-9941[8]FritschP,HausonMA,SporeCD,etal1ConstancyofRAPDprimeramplificationstrengthamongdistantlyrelatedtaxaoffloweringplants[J]1PlantMolecularBiologyReporter,-201[9]ChalmersKJ,NewtonAC,WaughR,etal1Evaluationoftheextentofgeneticvariationinmahoganies(Meliaceae)usingRAPDmarkers[J]1TheoreticalandAppliedGenetics,-5081[10]邓白罗,谭晓风,漆龙霖,等1山茶属红山茶组植物的RAPD分析及分类研究[J]1林业科学,):36-411[11]李秉滔,陈锡沐1中英文版《中国植物志(夹竹桃科)》的比较[J]1广西植物,):299-3051[12]EndressME,SennbladB,NilssonS,etal1AphylogeneticanalysisofApocynaceaes1str1andsomerelatedtaxainGen2tianales:Amultidisciplinaryapproach[J]1OperaBotanicalBelgica,-1021[13]EndressME,BruynsP1ArevisedclassificationoftheApocynaceae[J]1BotanicalReview,(Lancaster),-561[14]EndressME,StevensWD1TherenaissanceoftheApocynaceaes1l1:Recentadvancesinsystemations,phylogenyandevolu2tion[J]1AnnalsoftheMissouriBotanicalGarden,-5221[15]PotgieterK,AlbertVA1PhylogeneticrelationshipswithinApocynaceaes1l1basedontrnLintonandtrnL-Fspacersequencesandpropagulecharacters[J]1AnnalsoftheMissouriBotanicalGarden,-5491[16]LiedeS1SubtribeAstephaninae(Apocynaceae-Asclepiadoieae)reconsidered:NewevidencebasedoncpDra-andinterspe2cificphylogenyofwildFagopyrum(Polygonaceae)speciesbasedonnucleotidesequencesofnucleotideregionsinchloroplastDNA[J]1AmericanJournalofBotany,-5821[17]LiPT,LeeuwenbergAJM,MiddletonDJ1FloraofChina,Vol116[M]1Beijing:SciencePress,1[18]李　红,何　平1中国夹竹桃科属间关系的形态学数量评价[J]1西南师范大学学报,):590-5991[19]邱声祥,李德铢1鹅绒藤属及其近缘属的化学分类──兼论Vincetocium的恢复问题[J]1云南植物研究,1989,11(1):41-501[20]YehFC,YangRC,BoyleT1POPGENE1microsoftwindows-basedfreewareforpopulationgeneticanalysis1release1131[M]1Edmonton:UniversityofAlberta,19991[21]RohlfFJ1NTSYS-pcnumericaltaxonomyandmultivariateanalysissystem,Version2102[M]1NewYork:ExeterPublica2tionsSetauket,19981[22]李秉滔1中国夹竹桃目的形态演化趋势及其进化系统[J]1广西植物,):165-1701转载请保留本文连接：分享到：相关文章声明：《【夹竹桃科】12种夹竹桃科植物的RAPD分析》由“等你的消息”分享发布，如因用户分享而无意侵犯到您的合法权益，请联系我们删除。TA的分享