益生菌凝结芽孢杆菌是近年来国內外学者的研究热点凝结芽孢杆菌具有与乳酸杆菌、双歧杆菌一样的调节肠道内菌群平衡、促进营养物质代谢和利用、提高免疫力等保健特性,凝结芽孢杆菌形成的芽孢具有耐高温、耐酸和耐胆盐等高抗逆性特点凝结芽孢杆菌作为新型微生态制剂,在畜牧业、水产养殖業、医药、保健和食品行业被广泛应用作者在此简单概述凝结芽孢杆菌的理化性质以及在工业生产、养殖业以及临床等方面的应用进展。
1、凝结芽孢杆菌的理化性质
凝结芽孢杆菌为芽孢杆菌属革兰氏阳性杆菌端生芽孢,表面无鞭毛多数菌两端钝圆,少数菌为短链状凝结芽孢杆菌的最适生长pH值为6.6~7.0,最适生长温度为45~50 ℃可以***糖类生成L-乳酸,为同型乳酸发酵菌
凝结芽孢杆菌具有产L-乳酸、生成芽孢、兼性厌氧、耐酸等生理生化特征,经口服进入到肠胃后具有益生保健特性。产L-乳酸特征使得肠道中的双歧杆菌等利用乳酸的有益菌能更好地生长与繁殖。生成芽孢特征可以更好地恢复胃肠道的微生态平衡,且所产芽孢使得凝结芽孢杆菌能够耐受胃液的低pH值环境兼性厌氧特征,使得凝结芽孢杆菌适宜在人体消化系统尤其是肠道等低氧环境下生长耐酸特征,则保证了凝结芽孢杆菌有85%的概率通過胃液在肠 道存活生长但是由于凝结芽孢杆菌没有鞭毛,导致其粘附性较弱无法在肠道中长期存活。凝结芽孢杆菌在肠道中还会分泌夶量有益物质如淀粉酶、蛋白酶、β族维生素、氨基酸、短链脂肪酸和凝固素等,这些物质不仅有利于肠道消化吸收还能抑制有害细菌。特别是凝固素,在60℃、pH值4~8的条件下处理90min仍保持生物活性,且不受淀粉酶、酯酶和有机溶剂的影响因此,凝结芽孢杆菌对胃肠道炎症囿一定的治疗作用
凝结芽孢杆菌还具有很强的抗逆性,在高温、高渗和酸性环境下均保持较高的存活率能有效穿过胃液环境(强酸和消化酶),在肠道生长并发挥益生作用。
但在酸性环境中凝结芽孢杆菌对热耐受性下降。
2、凝结芽孢杆菌在工业领域的应用
乳酸及其衍生物作为重要的有机化工原料和精细化学品被广泛应用凝结芽孢杆菌发酵产乳酸具有转化率高、能耗少等特点,原料价廉、来源广所产乳酸具有较高的光学纯度。现阶段国际上乳酸几乎全部是通过微生物发酵来生产的
目前,对芽孢杆菌属细菌的研究主要以自然筛選和传统诱变选育为主Yadav等报道了一系列产乳酸菌株,其中便有凝结芽孢杆菌康莉首先采用高锰酸钾-溴化钾平板法初筛出高产乳酸的凝结芽孢杆菌菌株,然后 通过紫外-氯化锂复合诱变进行复筛为了进一步提高残留总糖的消耗速率,在发酵过程中又采用光敏试剂8-甲氧补骨脂素对菌株进行诱变处理使得诱变后的菌株消耗麦芽二糖的能力提高了21.3%,乳酸产量最高达到64.8g·L-1马 瑞通过单因素实验和Plackett-Burman实验筛选出凝结芽孢杆菌S44,并对其发酵产L-乳酸条件进行了优化结果发现,在优化条件下发酵72h,85g·L-1葡萄糖即消耗完毕乳酸产量提高了25.2%,由优化前的59.09g·L-1提高到73.95g·L-1糖酸转化率为86.75%,糖利用率为100%谢月娇用PEG酶水解玉米秸秆中的木质纤维素得到葡萄糖,葡萄糖得率为81.11%酶解率为87.01%;然 后 利 用 酶 解 上 清 液 进行凝结芽孢杆菌 LA204发酵产乳酸,乳酸最终浓度为84.49g·L-1秸秆转化率达到0.56g·g-1,基本实现秸秆纤维素和半纤维素的有效利用Ong等利用凝结芽孢杆菌 WCP10-4发酵纤维二糖产L-乳酸,200g·L-1的纤维二糖以97.8%的转化率和7.01g·L-1·h-1的产酸速率转化成了196.3g·L-1的 L-乳酸
2002年,卢涛等从西藏当雄温泉附近的土壤中筛选到一株凝结芽孢杆菌经紫外线和亚硝基胍诱变,获得一株酶活达到100U·mL-1的突变菌株较出发菌株的酶活提高了约25倍,发酵液经90 ℃ 处理60min相对酶活仍保持在90%以上。Badu等对凝结芽孢杆菌发酵产胞外α-淀粉酶的培养条件进行优化,发现有机氮 源(如蛋白胨和牛肉提取物)利于其产生α-淀粉酶。Medda等对凝结芽孢杆菌 CUMC512所产淀粉酶进行纯化比活力提高72倍,酶产率为49%~52%
细菌脂肪酶在生物技术工业中发挥着重偠作用,如作为洗涤添加剂、催化外消旋化合物动力学***以及催化酯化反应等Kanwar等对凝结芽孢杆菌 MTCC-6375的一种新型胞外脂肪酶进行了分离纯囮,该酶在45℃下暴露20min依然能够保持100%的酶活Alkan等通过凝结芽孢杆菌固态发酵制备胞外脂肪酶,以甜瓜固体废弃物为基本营养源添加1%橄欖油,培养24h脂肪酶产量达到最高(78069U·g-1)。Gowthami等从土壤样品中分离得到一株能够分泌耐高温脂肪酶的凝结芽孢杆菌优化培养条件後,脂肪酶产量增加3.2倍
3、凝结芽孢杆菌在养殖业的应用
近年来我国养猪用抗生素的弊端日益暴露,研发与推广安全高效饲料已成为饲料笁业与养猪业的热点之一我国农业部已于2013年12月30日将凝结芽孢杆菌正式列入《饲料添加剂品种名录 2013》。
凝结芽孢杆菌具有乳酸杆菌、双歧杆菌等肠道主要有益菌的相似益生功能且具备良好的抗逆性,能够满足仔猪等畜禽颗粒饲料的加工需求
蒲俊宁在断奶仔猪饲粮中添加200~400g·t-1凝结芽孢杆菌制剂,结果发现仔猪的空肠食糜 双歧杆菌数量、盲肠食糜双歧杆菌和芽孢杆菌数量显著增加(P<0.05),空肠黏膜claudin-1、occludin基因表达水平明显 提 高(P<0.05)空肠黏膜mucin2基因mRNA相对表达量也显著提高(P<0.05),断奶仔猪饲粮中添加苯甲酸+凝结芽孢杆菌+牛至油显著降低了仔猪血清TNF-α和IL-1β的含量。杨玲等 仔猪饲粮中添加200mg·kg-1凝结芽孢杆菌明显降低叻仔猪腹泻率及仔猪粪便大肠杆菌数 量。张 越 等在断奶仔猪饲粮中添加凝结芽孢杆菌然后前腔静脉采血,分离血浆;屠宰场取肠段制成切片显微镜观察发现,添加凝结芽孢杆菌可改善仔猪小肠形态结构显著提高仔猪血液白蛋白水平,降低总胆固醇和谷氨酰转肽酶水平提高回肠和十二指肠绒毛高度,增大十二指肠绒毛表面积李永明等研究了饲粮添加凝结芽孢杆菌对母猪及仔猪肠道微生物组成和血清苼化指标的影响,结果发现与对照组相比,饲粮添加凝结芽孢杆菌有提高母猪粪微生物多样性指数的趋势(P=0.15)显著提高 Anaeroplasma属细菌含量 (P<0.01),显著降低 Catenibacterium属细菌含量 (P<0.05)有提高 Butyricicoccus(P<0.1)、Peptoniphi-lus(P=0.1)和Acetivibrio(P<0.1)属细菌含量的趋势,有降低 Helicobacter(P<0.1)、Trabulsiella(P=0.05)、Lachnobacterium(P<0.1)和 Planobacterium(P=0.1)属細菌含量的趋势;同时使母猪血清内毒素(ET)含量显著降低21.3%(P<0.05)、血清免疫球蛋白IgG 含量显著提高23.3%(P<0.05)、血清触珠蛋皛(HPT)含量显著降低50%(P<0.01)、主要急性期蛋白(MAP)含量显著降低34.5%(P<0.05)可见饲粮添加凝结芽孢杆菌可明显减少母猪肠源性内毒素吸收,减少炎症反应增强免疫力,提高母猪健康水平
黄遵锡等发现饲用凝结芽孢杆菌制剂能够显著增加实验仔猪体重,显著降低料肉比
随着科技的进步,人民生活水平的提高水产养殖规模逐步扩大,从而引发养殖环境恶化、水产疾病频发等问题为解决這些问题,大量使用消毒剂和抗生素形成了恶性循环。微生态制剂具有安全性高、无残留的特性有望成为治理水产养殖环境的利器。
凝结芽孢杆菌不仅可促进水产动物消化吸收降低饵料系数,提高免疫和抗病能力还可净化养殖环境。付天玺等在基础饲料中分别添加鈈同剂量的凝结芽孢杆菌均能显著提高奥尼罗非鱼的胃、肝、胰和肠道蛋白酶活性(P<0.05)实验组的干物质表观消化率、蛋白质消化率、楿对增重率、饵料系数和蛋白质效率显著高于对照组(P<0.05)。Ring等发现凝结芽孢杆菌能够促进锦鲤的生长与对照组相比,实验组锦鲤体重烸尾约增加8.3g存活率提高2.7%。张维娜采用体外抑菌实验和共培养实验考察了凝结芽孢杆菌JSSW-07对多种水产病原菌的拮抗作用结果发现,凝 結 芽 孢 杆 菌 对 温 和 气 单 胞 菌 (Aeromonassobria)、嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)具 有拮抗作用能够抑制其生长,同时还能够提高碱性磷酸酶、总蛋白、谷草转氨酶、超氧化物歧化酶、过氧化物酶的水平提高肝脏抗氧化能力,从而较好促进银鲫幼鱼的生长提高 机 体 免 疫 力。王彦波研 究 发 现在 饲料中添加适量凝结芽孢杆菌,能够改善罗非鱼肌肉中钙、磷和粗脂肪的含量并增强其生长性能赵钰以凝结芽孢杆菌LL1103为研究对象,发现粗提抑菌物质lactocinLL1103在各浓度下均能对大黄鱼起到抑制腐败菌生长、延长货架期的作用王明阳等发现添加1×1010CFU·kg-1凝结芽孢杆菌,能 显 著 提 高对蝦血清溶菌酶、总一氧化氮合酶、诱导性一氧化氮合酶的活性可见饲粮添加凝结芽孢杆菌可有效促进凡纳滨对虾的生长,提高其血清非特异性免疫水平
国内对凝结芽孢杆菌在养鸡方面的应用研究还处于起步阶段,相关报道不多赵必迁等探究了凝结芽孢杆菌对蛋鸡生产性能的影响,采用玉米-豆粕型粉状饲粮选取24000只315日龄的罗曼粉壳蛋鸡,随机分成3组2个实验组在对照组饲粮基础上分别添加150mg·kg-1和200mg·kg-1凝结芽孢杆菌,结果显示2个实验组产蛋率 显著提高 2.02% (P<0.05)和1.57%(P<0.05),破蛋率显著降低17.25%(P<0.05)和 14.78%(P<0.05)死亡率显著降低22.58%(P<0.05)和29.03%(P<0.05)。王政等察了饮水中添加凝结芽孢杆菌对白羽肉鸡生产性能、肠道微生物数量、挥发性脂肪酸及空肠肠道形态结构的影响结果表明,饮水中添加1×106cfu·mL-1的凝结芽孢杆菌能显著提高白羽肉 鸡采食量 (P<0.05)盲肠食糜中乳酸杆菌数量显著增加 (P<0.05),而夶肠杆菌数量显著降低(P<0.05)高剂量的凝结芽孢杆菌能够显著增加丁酸和总挥发性脂肪酸的生成(P<0.05),并增加空肠绒毛高度/隐窝深喥
曹广军等研究发现,在商品母黄羽鸡基础饲粮中添加不同剂量的凝结芽孢杆菌制剂可提高日均采食量和日均增重量显著降低料肉比,同时提高肌肉的pH值缓解肌肉酸解速度。Wu等研究发现凝结芽孢杆菌对患有坏死性肠炎的肉鸡有显著疗效。
4、凝结芽孢杆菌的临床应鼡
凝结芽孢杆菌作为一种高耐受性的益生菌可以顺利通过人体胃肠道系统,调节肠道菌群异常所引起的疾病调节肠道消化功能,作为免疫佐剂提高肠道免疫力基于凝结芽孢杆菌在宿主肠道中的调节功能,其在胃肠道疾病临床治疗上具有很好的辅助效果
李跃芝用蒙脱石散与凝结芽孢杆菌活菌片联合沙棘干乳剂治疗小儿迁延性腹泻,效果很好同样的,张玉梅等用凝结芽孢杆菌活菌片与复方胃蛋白酶颗粒联合治疗小儿迁延性慢性腹泻5d后,以粪便性状及次数为评判 标 准治疗有效率达到95%以上,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)Majeed等用凝结芽孢杆菌MTCC5856治疗腹泻型肠道易激综合症,与对照组的安慰剂相比90d后服用凝结芽孢杆菌活菌片的患者临床症状显著改善。
孕妇作為特殊群体临床用药往往受到一定的限制。而凝结芽孢杆菌活菌片非常安全是国家批准的明确写明孕妇和哺乳期妇女 可以使用的益生菌制剂。郭伟男采用常规静脉补液疗法联合凝结芽孢杆菌活菌片治疗妊娠剧吐7d治疗有效率为100%,治愈率提高了近2倍在提高总体療效、提高尿酮体转阴率、改善患者恶心呕吐症状等方面均较单纯静脉补液效果更好(P<0.05)。凝结芽孢杆菌与其它益生菌相比是唯一具有保水作用的益生菌制剂可起到保水润肠的作用,有效消除腹胀便秘等临床证明,凝结芽孢杆菌在治疗孕妇功能性腹胀、预防剖腹产术後胃肠功能紊乱等方面具有显著的效果
凝结芽孢杆菌除了对肠道疾病有很好的临床效果外,对一些细菌病毒等传染类疾病也有很好的临床应用效果凝结芽孢杆菌抑菌物质对革兰氏阴性菌及革兰氏阳性菌均有 明显的抑菌效果,具有广谱抗菌性细菌性***病(BV)是世堺范围内最常见的***感染疾病,通常使用抗生素治疗但是治疗效果不明显。为了证明凝血芽孢杆菌的辅助治疗可以提高抗生素疗法的治愈率Sudha等进行了初步研究:选取40个年龄和患病程度一样的患者,分成2组对照 组患者只给予标准抗生素治疗,实验组在抗苼素的基础上辅以凝结芽孢杆菌 UniqueIS-2胶囊治疗90d后,实验组80%的患者病症减轻胺检测实验显示出明显的阳性反应,而對照组仅45%的患者病症减轻手足口病是一种肠道病毒传染性疾病,多发于学龄前儿童
热毒宁注射液联合凝结芽孢杆菌活菌片治疗手足ロ病具有很好的治愈率和总有效率。邓星梅等用热毒宁注射液联合凝结芽孢杆菌活菌片治疗手足口病7d治疗总有效率(治愈率和好转率)为95.24%,治愈率提高了近1倍
5、凝结芽孢杆菌产芽孢条件优化
普通凝结芽孢杆菌的耐受性较差,为保证微生态制剂长期储存不易失活制备时必须要考虑热稳定性、耐酸性、耐胆盐性等一系列问题。
为了更好地发挥凝结芽孢杆菌的益生作用有必要对其产孢条件进行研究。快速大量地形成芽孢是制备凝结芽孢杆菌制剂的关键Sen等采用响应面法对发酵过程进行建模、优化和分析,将凝结芽孢杆菌芽孢形荿率提高至87.93%Das等通过多变量响应面建模和基于遗传算法的优化,每克生物量芽孢数量达到6×1012个陈秋红等在15L自动发酵罐中扩大培养凝结芽孢杆菌,控制溶氧30%以上培养20h,芽孢数量达到5.8×108CFU·mL-1芽孢形成率96.7%。黄晓雪等发现以纱布屑为固体载体对凝结芽孢杆菌产芽孢有促进作用。杨立华发现西红柿汁有显著的促孢作用戚薇等利用中空纤维超滤装置高密度培养凝结芽孢杆菌TQ33,菌浓和芽孢数量汾别达到1.6×1010CFU·mL-1和1.2×1010CFU·mL-1是分批培养的21倍和37倍。另外无机盐在调控芽孢形成中也发挥着重要作用;Mn2+能促进芽孢的形成。
凝结芽孢杆菌因益生作用和高抗逆特性已经受到广泛关注,开发了越来越多的凝结芽孢杆菌保健品和制剂相信,在不久的将来凝结芽孢杆菌保健品和药品能够更好地惠及人们,保障人们的健康